目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-常量法>>糖酵解系列>> BC5340-50T/24SL -乳酸（L -LA）含量檢測(cè)試劑盒 糖酵解
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更新時(shí)間：2024-04-19 15:06:25瀏覽次數(shù)：810評(píng)價(jià)
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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
| 貨號(hào) | BC5340 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | L -乳酸（L -LA）含量檢測(cè) |
L-乳酸（L-LA）含量檢測(cè)試劑盒（WST顯色法）說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC5340
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體60 μL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑四 | 液體12 mL×1瓶 | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前按試劑二（V）：蒸餾水（V）=10μL：450μL（9T）的比例配制試劑二溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2、 試劑三：臨用前加入8 mL 蒸餾水混勻，可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；
3、 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1.04 mL蒸餾水配成100 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，2-8℃可保存12周；
產(chǎn)品說明：
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+，在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，其在450nm處有最大吸收峰，據(jù)此可計(jì)算乳酸含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
分析天平、研缽/勻漿器/超聲波細(xì)胞破碎儀、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、蒸餾水。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。
2. 細(xì)胞/細(xì)菌：按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量（104個(gè)）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞/細(xì)菌加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞/細(xì)菌（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。
3. 血清（漿）等液體：取100μL液體加入1mL提取液一，4℃ 12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。
注：提取液二需緩慢加入，加入后會(huì)產(chǎn)生大量氣泡，建議使用2mL EP管進(jìn)行操作。
二、測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，波長(zhǎng)調(diào)至450nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋為0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.020、0.01μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：
序號(hào) | 稀釋前濃度（μmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） |
1 | 100 | 50 | 950 | 5 |
2 | 5 | 100 | 700 | 0.625 |
3 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 |
4 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 |
5 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.078 |
6 | 0.078 | 200 | 200 | 0.039 |
7 | 0.039 | 200 | 200 | 0.020 |
8 | 0.020 | 200 | 200 | 0.010 |
實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需50µL標(biāo)準(zhǔn)溶液
3、加樣表：（按順序?qū)⑾铝性噭┘釉?/span>EP管中）
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣本（μL） | 50 | 50 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | - | - | 50 | - |
蒸餾水（μL） | - | 50 | - | 50 |
試劑一（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
試劑二（μL） | 50 | - | 50 | 50 |
試劑三（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑四（μL） | 150 | 150 | 150 | 150 |
充分混勻，于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱避光準(zhǔn)確反應(yīng)30min。 | ||||
蒸餾水（μL） | 450 | 450 | 450 | 450 |
混勻后，取出全部反應(yīng)液到1mL比色皿中，于450nm處測(cè)定吸光值，分別記為A測(cè)定管，A對(duì)照管，A標(biāo)準(zhǔn)管，A空白管，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管；ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)置一個(gè)對(duì)照管，空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測(cè)定1-2次。 | ||||
三、乳酸含量的計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，以其對(duì)應(yīng)的吸光值（ΔA標(biāo)準(zhǔn)）為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將
ΔA測(cè)定帶入公式中得到x（μmol/mL）。
2、乳酸含量計(jì)算
（1）按照蛋白含量計(jì)算
L-LA含量（μmol/mg prot）=x×V樣本÷（V樣本×Cpr）=x÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
L-LA含量（μmol/g 質(zhì)量）=x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W
（3）按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算
L-LA含量（μmol/104 cell）=x×（V上清+V提取液二）÷（N×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷N
（4）按照液體體積計(jì)算
L-LA含量（μmol/mL）=x×（V上清+V提取液二）÷ [V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]=13.0625×x
V樣本：加入的樣本體積，0.05mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，蛋白濃度需自行測(cè)定；V上清：提取時(shí)上清液體積，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二體積，0.15mL；V提取液一：加入的提取液一體積，1mL；N：細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量，104個(gè)；V液體：液體樣本體積，0.1mL。
注意事項(xiàng)：
1. ΔA測(cè)定的測(cè)定范圍在0.01-1之間。如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測(cè)定，如果測(cè)定吸光值小于線性范圍吸光值，需要增加樣本量后再次測(cè)定，注意同步計(jì)算公式。
2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。如需測(cè)定蛋白含量，需另取樣本。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 取0.1466g小鼠肝加入1mL提取液一，冰浴勻漿后離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清后用蒸餾水稀釋兩倍，按照測(cè)定步驟操作，使用1mL比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.972-0.092= 0.880，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.365x-0.0041，R2=0.9999，計(jì)算x=0.6477，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
L-LA含量（μmol/g 質(zhì)量）= 1.1875×x÷W×稀釋倍數(shù)（2）=10.493 μmol/g質(zhì)量。
2、 取0.1063g紅薯根加入1mL提取液一，冰浴勻漿后離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測(cè)定步驟操作，使用1mL比色皿測(cè)得計(jì)算ΔΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.124-0.099=0.025，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.365x-0.0041，R2=0.9999，計(jì)算x=0.0213，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
L-LA含量（μmol/g 質(zhì)量）=1.1875×x÷W=0.2382μmol/g質(zhì)量。
3、 取100μL羊血清加入1mL提取液一，離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測(cè)定步驟操作，使用1mL比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.587-0.095=0.492，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.365x-0.0041，R2=0.9999，計(jì)算x=0.3634，按照液體體積計(jì)算含量得：
L-LA含量（μmol/mL）=13.0625×x=4.748 μmol/mL。
參考文獻(xiàn)：
Eolbergrová J, MacMillan V, Siesj? B K. The effect of moderate and marked hypercapnia upon the energy state and upon the cytoplasmic NADH/NAD+ ratio of the rat brain[J]. Journal of neurochemistry, 1972, 19(11): 2497-2505.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0740/BC0745 己糖激酶（HK）活性檢測(cè)試劑盒
BC0540/BC0545 丙酮酸激酶（PK）活性檢測(cè)試劑盒
BC0530/BC0535 磷酸果糖激酶（PFK）活性檢測(cè)試劑盒
L -乳酸（L -LA）含量檢測(cè)試劑盒 糖酵解 L -乳酸（L -LA）含量檢測(cè)試劑盒 糖酵解
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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