目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5415-100T/96S亞鐵離子含量檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC5415 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 亞鐵離子含量檢測 |
亞鐵離子含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC5415
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體125mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體13 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 標準品：10mg FeSO4·7H2O，臨用前加入900μL蒸餾水和20μL濃硫酸，充分混勻，配制成40 mmol/L標準液，2-8℃可保存2周。
產品說明：
鐵是人體必需的微量元素之一，對于維持機體正常生理功能具有重要作用。亞鐵離子是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統(tǒng)的重要組成成分，幫助氧的運輸，促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紊亂，并影響機體的免疫功能。鐵過量是引發(fā)或加劇多種慢性?。ㄈ缣悄虿 ⑿哪X血管疾病、神經(jīng)退化性疾病等）的危險因素。Fe2+在酸性條件下與三吡啶基三嗪形成藍色配合物，在593nm處有吸收峰，通過測定該波長吸光度即可計算Fe2+的含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、可調式移液槍、冰、蒸餾水和濃硫酸。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌/細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率200W，超聲3秒，間隔7秒，總時間5min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清（漿）等液體樣本：直接測定。若有渾濁請離心后取上清待測。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至593nm，分光光度計蒸餾水調零。
2. 標準溶液的稀釋：取10μL 40 mmol/L標準液，加入990μL蒸餾水，混勻得到400 μmol/L標準液，將400 μmol/L標準液用試劑一進行稀釋得到50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125μmol/L的標準液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
3. 標準溶液稀釋可參考下表：
序號 | 稀釋前濃度（μmol/L） | 標準液體積（µL） | 試劑一體積（µL） | 稀釋后濃度（μmol/L） |
1 | 400 | 125 | 875 | 50 |
2 | 50 | 500 | 500 | 25 |
3 | 25 | 500 | 500 | 12.5 |
4 | 12.5 | 500 | 500 | 6.25 |
5 | 6.25 | 500 | 500 | 3.125 |
6 | 3.125 | 500 | 500 | 1.5625 |
7 | 1.5625 | 500 | 500 | 0.78125 |
備注：實驗中每個標準管需200µL標準液。
4. 在1.5mL離心管中按下表步驟加樣：
試劑名稱（µL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 200 | - | - |
標準液 | - | 200 | - |
試劑一 | - | - | 200 |
試劑二 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，37℃靜置10min | |||
氯仿 | 100 | - | - |
充分渦旋震蕩5min，之后12000g常溫離心10min，小心吸取上層無機相200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，測定593nm處吸光值，記為A測定，計算ΔA測定=A測定-A空白。 | 于593nm處吸光值，記為A標準、A空白，計算ΔA標準= A標準-A空白?？瞻坠芎蜆藴是€只需測1-2次。 | ||
三、亞鐵離子含量計算
1. 標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/L）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/L）。
2. 亞鐵離子含量的計算：
（1）按血清（漿）等液體體積計算：亞鐵離子含量（μmol/L）=x
（2）按樣本蛋白濃度計算：亞鐵離子含量（μmol/mg prot）=x×10-3×V提取÷（Cpr×V提取）=0.001x÷Cpr
（3）按樣本質量計算：亞鐵離子含量（μmol/g 質量）=x×10-3×V提取÷W=0.001x÷W
（4）按細胞/細菌數(shù)量計算：亞鐵離子含量(μmol/106 cell)=x×10-3×V提取÷N= 0.001x÷N
Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；V提取：加入試劑一的體積，1mL；W：樣本質量，g；N：細菌或細胞總數(shù)，以106計；10-3：單位換算系數(shù)，1μmol/L=10-3μmol/mL。
注意事項：
1. 用試劑一稀釋得到的標準液容易失效，建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
2. 如果?A測定過低或測定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進行測定；如果?A測定大于0.4，建議將樣本用試劑一適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。
3. 由于氯仿會腐蝕96孔板，所以在吸取上層無機相時需要注意不要吸到下層氯仿層。
實驗實例：
1、 取0.1055g 小鼠肝臟組織，加入1mL試劑一，冰浴勻漿，離心后取上清按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.272-0.050=0.222，根據(jù)標準曲線y=0.0076x-0.0013，R2=0.9993，計算x=29.38μmol/L，按樣本質量計算：
亞鐵離子含量（μmol/g 質量）=0.001x÷W =0.278 μmol/g 質量。
2、 取200μL牛血清，按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.301-0.050=0.251，根據(jù)標準曲線y=0.0076x-0.0013，計算x=33.20μmol/L，按液體體積計算：
亞鐵離子含量（μmol/L）=x=33.20 μmol/L。
參考文獻：
[1] Dong C, Yang M, Wang W. Study on spectrophotometric determination of Fe(Ⅱ) and Fe(Ⅲ) with 2, 4, 6- tri(2′-pyridyl)-1, 3, 5-triazine. [J]. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2004, (01):76-78.
[2] Huang Y, Ma H, Xu J, et al. Development and Validation of Reference Methods for Determination of Serum iron. [J]. Chinese Journal of Laboratory Diagnosis, 2011, 15(03):453-457.
[3] Wang H, Liu B, Ding Z, et al. Ferene method flow injection analysis as optimized in situ analysis of dissolved iron in marine waters. [J]. Marine Sciences, 2016, 40(05):82-87.
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