目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5395-100T/48S半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC5395 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測 |
半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC5395
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體1.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：試劑放于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加入4 mL蒸餾水溶解，-20℃分裝可保存4周，避免反復凍融。
2、 試劑二工作液：臨用前根據(jù)樣本量將試劑二用蒸餾水稀釋5000倍，現(xiàn)用現(xiàn)配。
1、 標準品：20μmol/mL *酸鈉標準液。
2、 0.625μmol/mL*酸鈉標準液的配制：臨用前取30μL的20μmol/mL 標準液于EP管中，加入930μL蒸餾水充分溶解，配制成0.625μmol/mL的*酸鈉標準液備用。
產(chǎn)品說明：
半胱氨酰亞砜裂解酶，簡稱蒜酶，又名蒜氨酸酶。半胱氨酰亞砜裂解酶幾乎存在于所有蔥屬植物中，如大蒜，洋蔥，韭菜等。蒜氨酸酶存在于液泡內(nèi)，其天然底物蒜氨酸存在于細胞質(zhì)中；蒜氨酸酶與蒜氨酸接觸并催化產(chǎn)生蒜素和順、反式阿霍烯并生成*酸和氨等副產(chǎn)物，也是大蒜等植物辛辣氣味的主要來源。
半胱酰胺亞砜裂解酶可以催化S-甲基-L-半胱*酸亞砜生成*酸。*酸可與2,4-二硝 * 肼反應生成2,4-二硝*腙，在堿性條件下顯棕紅色；測定505nm吸光度的變化，即可計算CSL酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水和冰。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，4℃浸提30分鐘。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2. 液體樣本：直接測定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁，則離心取上清后再測定)。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，可見分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
2、操作表：（在1.5mLEP管或者96孔板中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 標準空白管 |
樣本 | 20 | 20 | - | - |
標準品 | - | - | 20 | - |
試劑一 | 20 | - | - | - |
試劑二工作液 | 20 | 20 | 20 | 20 |
蒸餾水 | - | 20 | 20 | 40 |
混勻后，37℃反應30min | ||||
試劑三 | 20 | 20 | 20 | 20 |
試劑四 | 20 | 20 | 20 | 20 |
混勻后，37℃反應30min | ||||
試劑五 | 100 | 100 | 100 | 100 |
混勻，室溫放置10min，在505nm波長處測各管吸光度。記作A測定，A對照，A標準，A標準空白。?A測定=A測定-A對照，?A標準=A標準-A標準空白。（標準管和標準空白管只需做1-2次。）
三、CSL活性計算
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：37℃，每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol *酸定義為一個酶活力單位。
CSL活性（U/mg prot）=（?A測定×C標準÷?A標準）×V樣÷（V樣×Cpr）÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準÷Cpr ×F
(2) 按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：37℃，每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol *酸定義為一個酶活力單位。
CSL活性（U/g 質(zhì)量）=（?A測定×C標準÷?A標準）×V樣÷（V樣÷V樣總×W）÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F
(3) 按血清（漿）等液體體積計算
單位的定義：每mL血清（漿）等液體每分鐘催化產(chǎn)生1μmol *酸定義為一個酶活力單位。
CSL活性（U/mL）=（?A測定×C標準÷?A標準）×V樣÷V樣÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準×F
C標準: *酸鈉標準液的濃度，0.625μmol/mL；V樣：反應體系中加入的樣本體積，0.02mL；V樣總：加入的提取液體積，1mL；T：反應時間，30min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；F：樣本稀釋倍數(shù)。
注意事項：
1. 如果測定結(jié)果?A測定＞1，可以對樣本用蒸餾水進行稀釋或者縮短第一步反應時間；吸光值較小，可以加大樣本量或者延長第一步反應時間至1h或者更長時間。注意計算時同步修改計算公式。
2. 對于初次測定樣本，建議將樣本勻漿液用蒸餾水進行梯度稀釋后測定，選取最佳的稀釋倍數(shù)。洋蔥、香菇、大蒜類樣本建議直接稀釋4-10倍后再進行最佳稀釋倍數(shù)摸索。（實驗室洋蔥進行了8倍稀釋，蒜進行了64倍稀釋）
實驗實例：
1、 稱取0.1233g蒜樣本，加入提取液進行冰浴勻漿，上清用蒸餾水稀釋64倍，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A測定=A測定-A對照=0.46-0.113=0.347，?A標準=A標準-A標準空白=0.551-0.064=0.487，帶入公式計算：
CSL活性（U/g 質(zhì)量）= 0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=7.693 U/g 質(zhì)量。
2、 稱取0.1263g洋蔥樣本，加入提取液進行冰浴勻漿，上清稀釋4倍，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算?A測定=A測定-A對照=0.477-0.382=0.095，?A標準=A標準-A標準空白=0.551-0.056=0.487，帶入公式計算：
CSL活性（U/g 質(zhì)量）= 0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=0.169 U/g 質(zhì)量。
參考文獻：
[1] Su Qianqian, Tang Jing, Zhao Liyan, et al. Effects of nanocomposite packaging on the quality and formaldehyde content of shiitake mushrooms during storage [J]. Food Science, 2015(8):6.
[2] Kumagai H, ?Hidetoshi KONO, Sakurai H, et al. Comparison of C-S Lyase in Lentinus edodes and Allium sativum [J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2022(66): 2560–2566.
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