目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5245-100T/96S脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量檢測(cè)試劑盒 微量法
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更新時(shí)間：2024-04-19 09:24:01瀏覽次數(shù)：703評(píng)價(jià)
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| CAS | 詳詢(xún) | 純度 | 詳詢(xún) |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢(xún) | 分子式 | 詳詢(xún) |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號(hào) | BC5245 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量檢測(cè) |
脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC5245
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體11mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
稀釋液 | 液體20mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑二：臨用前取1瓶試劑二加入7mL 蒸餾水，此試劑較難溶，可以在70℃加熱并劇烈振蕩以促進(jìn)溶解，或者通過(guò)超聲處理以促進(jìn)溶解。每次用前需檢查是否有粉劑析出。用不完的試劑可在2-8℃中保存一個(gè)月。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品：為1000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液
產(chǎn)品說(shuō)明：
脂質(zhì)過(guò)氧化物（lipid hydroperoxide LPO）是不飽和脂肪酸鏈經(jīng)自由基或活性氧作用后產(chǎn)生的過(guò)氧化物。病理情況下，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)可導(dǎo)致原本低含量的LPO升高。LPO含量升高會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷，LPO含量與機(jī)體免疫系統(tǒng)和衰老密切相關(guān)。
LPO在酸性條件下加熱產(chǎn)生丙二醛（MDA），MDA與硫代巴*妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成棕紅色物質(zhì)三甲川（3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二*），其最大吸收波長(zhǎng)在 532nm，進(jìn)行比色后可估測(cè)樣本中LPO的含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲波破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1:5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取
液）加入提取液，冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000:1 的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲 3s，間隔 7s，總時(shí)間3min），8000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液或其他液體：直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。
二、測(cè)定步驟
1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至532nm和600nm，可見(jiàn)分光光度計(jì)需用蒸餾水調(diào)零。
2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)液為1000nmol/mL的MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液，將標(biāo)準(zhǔn)液用稀釋液稀釋至20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625nmol/mL備用，具體稀釋可參考下表。
序號(hào) | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 稀釋液體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） |
1 | 1000 | 40 | 960 | 40 |
2 | 40 | 500 | 500 | 20 |
3 | 20 | 500 | 500 | 10 |
4 | 10 | 500 | 500 | 5 |
5 | 5 | 500 | 500 | 2.5 |
6 | 2.5 | 500 | 500 | 1.25 |
7 | 1.25 | 500 | 500 | 0.625 |
8 | 0.625 | 500 | 500 | 0.3125 |
9 | 0.3125 | 500 | 500 | 0.15625 |
備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需120µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3、在EP管中按下表步驟加樣：
試劑名稱(chēng) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本（μL） | 120 | - | - | - |
蒸餾水（μL） | - | 120 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)液（μL） | - | - | 120 | - |
稀釋液（μL） | - | - | - | 120 |
試劑一（μL） | 90 | 90 | 90 | 90 |
試劑二（μL） | 60 | 60 | 60 | 60 |
試劑三（μL） | 30 | 30 | 30 | 30 |
將混合液在 45℃（植物樣本）或100℃（其他樣本）水浴60min 后（標(biāo)準(zhǔn)管在兩個(gè)溫度水浴均可），置于冰浴中冷卻，8000g，常溫，離心 10min。吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，測(cè)定各樣本在 532nm和600nm處的吸光度。分別計(jì)算 ΔA=（A532測(cè)定-A532對(duì)照）-（A600測(cè)定-A600對(duì)照），ΔA標(biāo)準(zhǔn)=（A532標(biāo)準(zhǔn)-A532空白）-(A600標(biāo)準(zhǔn)-A600空白）（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，空白管和對(duì)照管只需做 1-2 次）。
三、LPO含量的計(jì)算
1. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，nmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將ΔA（y，ΔA）代入公式計(jì)算樣本濃度（x，nmol/mL）
2. 按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
LPO含量（nmol/mg prot）= x×V樣÷（Cpr×V樣）= x÷Cpr
3. 按樣本質(zhì)量計(jì)算
LPO含量（nmol/g 質(zhì)量）= x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）= x÷W
4. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
LPO含量（nmol/104cell）= x×V樣÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））= x÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）
5. 按照液體樣本體積計(jì)算
LPO含量（nmol/mL）= x
V樣：加入樣本體積，0.12mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1. 待測(cè)液如果有密集小氣泡，建議靜置20min左右等待氣泡消失再測(cè)，以免影響測(cè)定結(jié)果，如果有少量氣泡可以通過(guò)低速離心或輕磕等方式來(lái)消除。
2. 待測(cè)液如果尚未澄清，可吸取上清液后再次離心。
3. 為防止水浴60min過(guò)程中水分散失，建議使用螺旋管或用封口膜給EP管纏口。
4. 如果用高溫助溶試劑二，需要待其冷卻至室溫后再使用。
5. 如果測(cè)定吸光值過(guò)低或接近空白，適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或加大樣本量后，重新測(cè)定。如果吸光值過(guò)大或超過(guò)檢測(cè)范圍（A532＞1.5或者ΔA＞1.5時(shí)），建議將樣本適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. 稱(chēng)取0.1192 g綠蘿，加入1mL提取液，冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)，之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)定并進(jìn)行計(jì)算A532測(cè)定= 0.139，A532對(duì)照= 0.042，A600測(cè)定= 0.054，A600對(duì)照= 0.039，?A=0.082，將?A代入標(biāo)曲公式y = 0.0218x - 0.0054，R2=0.9997，得出x=4.009，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：
LPO含量（nmol/g 質(zhì)量）= x÷W = 33.63 nmol/g 質(zhì)量。
2. 稱(chēng)取0.1209g大鼠心臟，加入1mL提取液，冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)，之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)定并進(jìn)行計(jì)算A532測(cè)定 = 0.097，A532對(duì)照 = 0.047，A600測(cè)定 =0.065，A600對(duì)照 = 0.042，?A=0.027，將?A代入標(biāo)曲公式y = 0.0525x - 0.0007，R2=0.9993，得出x=0.528，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：
LPO含量（nmol/g 質(zhì)量）= x÷W = 4.367 nmol/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：
Hiroshi Ohkawa, Nobuko Ohishi, Kunio Yagi, Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction[J], Analytical Biochemistry,1979.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0200/BC0205 過(guò)氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒
BC0090/BC0095 過(guò)氧化物酶（POD）活性檢測(cè)試劑盒
BC0190/BC0195 多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)試劑盒
BC0210/BC0215 苯*酸解氨酶（PAL）活性檢測(cè)試劑盒
脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量檢測(cè)試劑盒 微量法 脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量檢測(cè)試劑盒 微量法
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