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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC1415 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 超氧陰離子清除能力檢測 |
超氧陰離子清除能力檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC1415
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體1.3mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前每瓶加 5.34mL 蒸餾水充分溶解。2-8℃保存4周。
產(chǎn)品說明：
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞 作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm 處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關(guān)。 注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器，冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000 g，4℃，離心10 min，取上清，置于冰上待測。
2、液體樣本：直接檢測。若有渾濁則離心后取上清待測。
3、細胞樣本：收集細胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細胞（功率200w，超聲3s，間隔10s，重復30次），然后10000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至530 nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表：
試劑名稱（µL） | 空白管 | 測定管 | |
試劑一 | 10 | 10 | |
試劑二 | 40 | 40 | |
充分混勻， 25℃反應(yīng) 1min | |||
水 | 25 | - | |
樣品 | - | 25 | |
試劑三 | 50 | 50 | |
充分混勻， 37℃反應(yīng) 30min | |||
試劑四 | 50 | 50 | |
試劑五 | 50 | 50 | |
充分混勻， 37℃顯色 20min，在 530nm 處測定空白管和測定管的吸光值，分別記為A空白和A測定。空白管只需測定1-2次。 | |||
三、超氧陰離子清除能力計算
超氧陰離子清除率（%）=（A空白-A測定）÷A空白×100%
注意事項：
1. 樣本制備好之后，立刻進行測定，請勿將樣本進行長時間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。
實驗實例：
1. 稱取0.1 g黃楊葉片組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，10000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。使用96孔板，按照測定步驟操作，計算A空白=0.762，A測定=0.311，按公式計算超氧陰離子清除率=（0.762-0.311）÷0.762×100%=59.18%
2. 吸取25μl的羊血清，使用96孔板，按照測定步驟操作，計算A空白=0.762，按公式計算超氧陰離子清除率=（0.762-0.342）÷0.762×100%=55.12%
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