目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2025-100T/48S乙酰*堿酯酶(AchE)活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC2015 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 測定原理： 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛 |
乙醇酸氧化酶（GO）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2015
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體60 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前加入2.5 mL雙蒸水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
產(chǎn)品說明：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是乙醇酸循環(huán)中的一種酶，也是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶，催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，通過測定乙醇酸氧化酶活性，可以了解植物光合和呼吸代謝的基本方法。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和鹽酸苯 肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板UV板、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清置冰上待測。
細胞或細菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
二、測定步驟
紫外分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至324nm，紫外分光光度計蒸餾水調(diào)零。
將試劑一25℃預(yù)熱15min。
樣本測定：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：
| 試劑名稱 | 測定管 | 空白管 |
| 試劑一（μL） | 130 | 130 |
| 蒸餾水（μL） | - | 10 |
| 樣本（μL） | 10 | - |
| 試劑二（μL） | 40 | 40 |
| 試劑三（μL） | 20 | 20 |
| 充分混勻，立即測定324nm處10s和190s吸光值A1和A2，計算ΔA測定管=A2測定-A1測定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。（空白管只需做1-2次） | ||
注意事項：
測定之前進行預(yù)實驗，若吸光值A(chǔ)1>1，請將樣本用提取液進行適當?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
色素含量較高的樣本，可在提取酶時加活性炭吸附。
空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，其OD值變化不超過0.02。
實驗實例：
稱取約0.1g三葉草組織，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清進行檢測，使用微量石英比色皿測得ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.8956-0.7839=0.1117，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.1117-0.0083=0.1034，按樣本質(zhì)量計算酶活得：GO酶活（U/g 質(zhì)量）=392.16×ΔA÷W=405.4934 U/g 質(zhì)量。
稱取約0.1g菠菜組織，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清稀釋2倍進行檢測，使用微量石英比色皿測得ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.9286-0.8105=0.1181，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.1181-0.0083=0.1098，按樣本質(zhì)量計算酶活得：GO酶活（U/g 質(zhì)量）=392.16×ΔA÷W×2（稀釋倍數(shù)）=861.1834 U/g 質(zhì)量。
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