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            目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC0385丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法

            丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法
            • 丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法
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            參考價 面議
            具體成交價以合同協(xié)議為準
            參考價 面議
            具體成交價以合同協(xié)議為準
            • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
            • 型號 BC0385
            • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
            • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
            • 所在地 北京市
            屬性

            $NV_PropertyInfoName.SubString(0,25)

            >

            更新時間:2024-08-02 10:04:30瀏覽次數(shù):2899評價

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            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
            貨號 BC0385 應用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合
            主要用途 丙酮酸脫氫酶活性測定
            丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法
            儲存條件-20℃
            有效期6個月
            英文名稱Pyruvate Dehydrogenase(PDH) Activity Assay Kit
            單位盒
            規(guī)格100T/96S
            測定意義:PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞

            丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒說明書  微量法

            注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

            貨號:BC0385

            規(guī)格:100T/96S

            產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

            丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法

            丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒 微量法


            試劑名稱

            規(guī)格

            保存條件

            試劑一

            液體110 mL×1瓶

            2-8℃保存

            試劑二

            液體0.6 mL×2支

            -20℃保存

            試劑三

            液體7.5mL×2瓶

            2-8℃保存

            試劑四

            液體13mL×1瓶

            2-8℃保存

            試劑五

            粉劑×2支

            -20℃保存

            試劑六

            液體1mL×1

            2-8℃保存

            試劑七

            液體4mL×1瓶

            2-8℃保存

            溶液的配制:

            1. 試劑二為易揮發(fā)試劑,用完后盡快密封,-20保存。

            2. 工作液的配制:臨用前把5.75mL試劑四、一支試劑五、0.45mL試劑六、1.75mL試劑七轉(zhuǎn)移到一瓶試劑三中混合溶解待用(共15.45mL,約85T;用不完的試劑-20℃分裝保存,可保存4周。避免反復凍融。

            產(chǎn)品說明:

            PDHEC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。

            PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導致605nm光吸收的減少。

            Pyruvic Acid + Thiamine Pyrophosphate             Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate

            Dichlorophenolindophenol(605nm) + Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate       Reduced Dichlorophenolindophenol

            注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

            需自備的儀器和用品:

            可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

            操作步驟:

            一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

            1. 組織:稱取約 0.1g 組織,加入1mL 試劑一和 10μL試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4 ℃ 11000g離心10min,取上清,置冰上待測。

            2. 細胞或者細菌樣本:先收集500萬細胞或細菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;之后加入1mL試劑一和 10μL試劑二,冰浴超聲波破碎細菌(功率200 W,超聲3 s,間隔7 s,總時間5 min);然后11000g,4℃,離心10 min,

            取上清置于冰上待測。

            3. 血清(漿)及其它液體樣本:直接檢測。若溶液有渾濁則離心后去上清進行測定。

            二、測定步驟

            1、 可見分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至605nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

            2、 每個樣本需要180μL工作液,根據(jù)實驗所需取出一定量的工作液置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴鍋中水浴10min。

            3、 空白管:在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL水,混勻,立即記錄605nm10s吸光值A11min10s后的吸光值A2,計算ΔA空白=A1-A2。空白管只需測1-2

            4、 測定管:在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL樣本,混勻,立即記錄605nm10s吸光值A31min10s后的吸光值A4,計算ΔA測定=A3-A4。

            三、PDH活性計算

            a.用微量比色皿測定的計算公式如下

            1. 按樣本蛋白濃度計算

            單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性(U/mg prot=[(ΔA測定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(Cpr×V) ÷T

                                    =904.762×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

            2. 按樣本質(zhì)量計算

            單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性(U/g 質(zhì)量)=[(ΔA測定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(V÷V樣總×W) ÷T

                                    =913.81×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

            3. 按細菌或細胞數(shù)量計算

            單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性(U/104 cell=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷ε×d×109]÷(V÷V樣總×500)÷T

                                    =1.828×(ΔA測定-ΔA空白)

            4. 按樣本體積計算

            單位的定義:每mL液體在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性U/mL=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷V÷T

            =904.762×(ΔA測定-ΔA空白)

               V反總:反應體系總體積,1.9×10-4Lε2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01mLV樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mLT:反應時間,1minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

            b.96孔板測定的計算公式如下

            1.按樣本蛋白濃度計算

            單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性(U/mg prot=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷ε×d×109]÷(Cpr×V) ÷T

                                    =1809.524×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

            2.按樣本質(zhì)量計算

            單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性(U/g 質(zhì)量)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷ε×d×109]÷(V÷V樣總×W) ÷T

                                   =1827.62×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

            3.按細菌或細胞數(shù)量計算

            單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性(U/104 cell=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷ε×d×109]÷(V÷V樣總×500) ÷T

                                    =3.655×(ΔA測定-ΔA空白)

            4.按樣本體積計算

            單位的定義:每mL液體在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

            PDH活性U/mL=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷V÷T

            =1809.524×(ΔA測定-ΔA空白)

            V反總:反應體系總體積,1.9×10-4L;ε2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104 L/mol/ cm;d96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01mLV樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mL;T:反應時間,1min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

            注意事項:

            1、測定過程中所有樣本在冰上放置并于2小時內(nèi)檢測,以免變性和失活。

            2、測定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進行稀釋。計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。若測定管的ΔA0.01,需加大樣本量后重新測定,注意同步修改計算公式。

            3、由于試劑一中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去試劑一的蛋白含量。

            實驗實例:

            1、 0.1g小鼠肝臟加入1mL試劑一和10μL試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4℃、11000g離心10min,取上清置冰上,按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定=A3-A4=1.3106-1.1183=0.1923,ΔA空白=A1-A2 =1.3325-1.3314=0.0011,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

            PDH活性(U/g質(zhì)量)= 913.81×(ΔA測定-ΔA空白)÷W=1747 U/g質(zhì)量。

            相關(guān)發(fā)表文獻:

            [1] Peng S, Wang Y, Zhou Y, et al. Rare ginsenosides ameliorate lipid overload-induced myocardial insulin resistance via modulating metabolic flexibility[J]. Phytomedicine, 2019, 58: 152745.

            參考文獻:

            [1] Guitart M, Andreu A L, García-Arumi E, et al. FATP1 localizes to mitochondria and enhances pyruvate dehydrogenase activity in skeletal myotubes[J]. Mitochondrion, 2009, 9(4): 266-272.

            相關(guān)系列產(chǎn)品:

            BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

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