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            R8300-親和層析填料 rProtein G Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
            • R8300-親和層析填料 rProtein G Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)

            貨物所在地:北京北京市

            地: 北京

            更新時(shí)間:2025-03-08 21:00:08

            瀏覽次數(shù):105

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            親和層析填料 rProtein G Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
            貨號(hào) :R8300
            規(guī)格 :5ml
            保存 :2-8℃
            Protein G 是一種分離自金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁蛋白, 主要通過 Fc 片段結(jié)合哺乳動(dòng)物IgG,但是不與狗 lgG 結(jié)合,不結(jié)合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 與蛋白 G 不同來源及亞類的免疫球蛋白結(jié)合能力丌一樣

            親和層析填料 rProtein G Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)
            貨號(hào) :R8300
            規(guī)格 :5ml
            保存 :2-8℃


            產(chǎn)品 介紹 :
                 Protein G 是一種分離自金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁蛋白, 主要通過 Fc 片段結(jié)合哺乳動(dòng)物IgG,但是不與狗 lgG 結(jié)合,不結(jié)合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 與蛋白 G 不同來源及亞類的免疫球蛋白結(jié)合能力丌一樣,具體見表。天然 Protein A 有五個(gè) IgG 結(jié)合區(qū)域和一些未知功能的區(qū)域,重組 protein A 去除了與白蛋白及細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn),只含有五個(gè) IgG 結(jié)合區(qū)域,減少了非特異性吸附。


            rProtein G Beads  產(chǎn)品性能 :

            指標(biāo) 性能
            基質(zhì)4%瓊脂糖微球
            配體重組蛋白 A
            載量 >4  0mg 人 I  gG/ml 介質(zhì)
            粒徑(µm)  45- 165
            大流速0.1 MPa, 1 bar
             pH 穩(wěn)定范圍 3-12
            儲(chǔ)存緩沖液20% 乙醇
            儲(chǔ)存溫度2°C-8°C


              Protein A  和   Protein G  對(duì)不同抗體的結(jié)合能力   :

            種屬 亞型Protein A  Protein G
            HumanIgA varible— 
            HumanIgD— — 
            HumanIgE— — 
            HumanIgG1++++++++
            HumanIgG2++++++++
            HumanIgG3— ++++
            HumanIgG4++++++++
            HumanIgM varible— 
            Avian egg yolkIgY— — 
            Cow  ++ ++++
            Dog  ++++++ 
            Goat —  ++++
            Guinea pigIgG1++++  ++
            Guinea pigIgG2++++  ++
            Hamster +++
            HorseTotal IgG    ++++++
            Koala — +
            Liama — +
            Monkey(rhesus) ++++++++
            MouseIgG1+++++
            MouseIgG2a ++++++++
            MouseIgG2b ++++++
            MouseIgG3+++++
            MouseIgMvariable
            Pig +++ +++ 
            Rabbit Total IgG+++++++ 
            RatIgG1+
            RatIgG2a++++
            RatIgG2b++
            RatIgG3+++
            Sheep Total IgG  +/- ++


            ++++=結(jié)合能力強(qiáng);  ++=結(jié)合能力中等;  —=結(jié)合能力弱或沒有結(jié)合 


            純化流程 :
            1 、Buffer  的準(zhǔn)備

            所用水和 Buffer 在使用之前建議用  0.22µm 或 0.45 µm 濾膜過濾。 
            結(jié)合/ 洗雜  Buffer:   0.15M NaCl,  20 mM Na 2 HPO 4 ,  pH 7.0
            洗脫  Buffer: 0.1M 甘氨酸,  pH 3.0
            中和液:   1M Tris-HCl, pH8.5


            2 、 樣品準(zhǔn)備
                 上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和 pH 值, 可以用結(jié)合/洗雜緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋,或者樣品用結(jié)合/洗雜緩沖液透析。
                 樣品在上樣前建議離心或用  0.22µm 或 0.45µm 濾膜過濾,減少雜質(zhì),提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。 
            3 、 樣品純化
                1) 將 rProtein A Beads 裝入合適的層析柱,層析用 5 倍柱體積的結(jié)合 Buffer 進(jìn)行平衡,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護(hù)蛋白的作用。 
                2) 將樣品加到平衡好的 rProtein A Beads 中(保證目的蛋白與 rProtein A Beads 充分接觸,提高目的蛋白的回收率) ,收集流出液。 
                3) 用 10-15 倍柱體積的洗雜 Buffer 進(jìn)行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。    

                4) 使用 5-10 倍柱體積的洗脫  Buffer,收集洗脫液,即目的蛋白組分。 
                5) 依次使用 3 倍柱體積的結(jié)合  Buffer 和 5 倍柱體積的去離子水平衡填料,后再用 5 倍柱 體積的 20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的 20%的乙醇中,置于 4 度保存,防止填料被細(xì)菌污染。

            
            4 、   SDS-PAGE  檢測(cè)
                將使用純化產(chǎn)品得到的樣品(包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分)以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測(cè)純化效果。 

             

            填料清洗
                rProtein A Beads 可以重復(fù)使用而無需再生, 但隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和結(jié)合載量都下降,嚴(yán)重影響柱子的性能,這時(shí)需要對(duì)樹脂進(jìn)行清洗。
            去除一些沉淀或變性物質(zhì)用 2 倍柱體積的 6M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗,然后立即用 5 倍柱體積的   PBS, pH 7.4 清洗。
                去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
                用 3-4 倍柱體積的 70%乙醇或 2 倍柱體積的 1% Triton  X-100 清洗,然后然后立即用 5倍柱體積的   PBS, pH 7.4 清洗。 


            問題及解決方案

             原因分析推薦解決方案
            柱子反壓過高篩板被堵塞清洗或更換篩板
            柱子反壓過高填料被堵塞 按照填料清洗部分進(jìn)行樹脂清洗
            柱子反壓過高填料被堵塞裂解液中含有微小的固體顆粒, 建議上柱
            前使用濾膜    (0.22 or 0.45 µm) 過濾, 或
            者離心去除。
            去除樣品或柱子中的氣泡  樣品純化過程中曲線不穩(wěn)樣品或 buffer 中有氣泡去除樣品或柱子中的氣泡
            去除樣品或柱子中的氣泡  樣品純化過程中曲線不穩(wěn)樣品或 buffer 中有氣泡樣品和 buffer 進(jìn)行脫氣
            洗脫組分中沒有目的蛋白 樣品中抗體濃度太低使用其抗原做配體的介質(zhì)
             抗體被降解適當(dāng)?shù)奶岣呦疵?pH
            回收率逐漸減低上樣量太多 減少上樣量
            回收率逐漸減低柱子太臟,載量降低按照填料清洗部分進(jìn)行樹脂清洗

             

            親和層析填料 rProtein G Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)訂購說明:

            1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
            2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
            3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
            4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
            5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


            親和層析填料 rProtein G Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)(純化樹脂)運(yùn)輸說明:

            1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
            2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
            3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。

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