Na+k+ ——ATP酶活性檢測試劑盒 常量法

產(chǎn)品名稱:：  Na+k+ ——ATP酶活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名： Na+K+——ATPase Assay KitAMP Content Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0060          產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣                       產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：240
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：ATP酶活性檢測試劑盒|ATP檢測試劑盒|Na+k+ ——ATP檢測試劑盒|試劑盒

簡要介紹：
Na+K+- ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
     Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2支，-20℃保存。用時每支加1mL蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑四：液體2mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。用時加入3mL雙蒸水， 4℃保存。
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。
試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。
試劑八：液體15mL×1 瓶，室溫保存。
標準品：10μmol/mL 標準磷貯備液 1mL×1支，4℃保存。
0.5μmol/mL標準磷應(yīng)用液配制：將標準品 20倍稀釋，即取 0.1mL標準品加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按H₂O：試劑六：試劑七：試劑八=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說明：
Na⁺K⁺- ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
Na⁺K⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品酶液的制備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
    細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
    組織：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）

3定磷(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑)

混勻，40℃水浴10 min，冷卻室溫，在 660nm處比色。
三、計算
1、血清（漿）Na⁺K⁺-ATPase活力的計算:
定義：規(guī)定每小時每毫升血清（漿）中Na⁺K⁺- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na⁺K⁺-ATP酶活力（U/mL）= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷V樣÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）

2、組織、細菌或細胞中Na⁺K⁺- ATPase活力的計算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義：規(guī)定每小時每毫克組織蛋白中Na⁺K⁺- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/ mg prot)= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷（Cpr×V樣）÷T =7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
定義：規(guī)定每小時每克組織中Na⁺K⁺-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g鮮重)= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷W
（3）按細菌或細胞總數(shù)計算：
定義：規(guī)定每小時每1萬個細菌或細胞中Na⁺K⁺-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/10⁴cell)= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
C標準管：標準管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.5mL；V樣：加入樣本體積，0.2mL ；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：反應(yīng)時間，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
注意事項：
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒50管保證測 24份Na⁺K⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。
3、空白管和標準管只要做一管。

相關(guān)文獻：
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen， Ying Zhao， Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070
《Transcriptomic analysis reveals effects of fucoxanthin on intestinal glucose transport》 作者:Wanxiu Cao,Jing Li,Yaoxian Chin,Robert W.Li, Changhu Xue,Qingjuan Tang 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID:

Na+k+ ——ATP酶活性檢測試劑盒 常量法