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苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) 微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 

貨號(hào)：BC0215 

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：  

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL 雙蒸水充分溶解待用，可 4℃保存一周。 試劑三：液體 1mL×1 瓶，4℃保存。

苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性生化檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明： 

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類(lèi)代謝的關(guān)鍵酶和 限速酶，在動(dòng)物體內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)。與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、類(lèi)黃酮類(lèi)植保素、黃酮類(lèi)色素等 合成密切相關(guān)，在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育、抗病、抗逆反應(yīng)中起重要作用。 PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有大吸收值，通過(guò)測(cè) 定吸光值升高速率計(jì)算 PAL 活性。

所需的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、 研缽、冰和蒸餾水。

苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性生化檢測(cè)試劑盒

操作步驟：

一、粗酶液提取 稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上 待測(cè)。 

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 290nm，蒸餾水調(diào)零。

在 EP 管或 96 孔板中按順序加入下列試劑

混勻，靜置 10min 后，290nm 處記錄測(cè)定管吸光值 A1 和對(duì)照管吸光值 A2，△A=A1-A2。 注意：對(duì)照管只要做一管

PAL 活性計(jì)算 

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 

（1） 按蛋白濃度計(jì)算 單位的定義：每 mg 組織蛋白在該反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個(gè)酶活性 單位。 PAL（U/mg prot）=ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.1÷T÷Cpr =66.7×ΔA÷Cpr

• 按按樣本鮮重計(jì)算 單位的定義：每 g 組織在該反應(yīng)體系中分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個(gè)酶活性單位。 PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.1÷T÷W =66.7×ΔA÷W V 樣：加入樣本體積，5µL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本 蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量。

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1） 按蛋白濃度計(jì)算 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.05 定義為一個(gè)酶活性單 位。 PAL（U/mg prot）=ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.05÷T÷Cpr =133.4×ΔA÷Cpr

（2） 按按樣本鮮重計(jì)算 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.05 定義為一個(gè)酶活性單位。 PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.05÷T÷W =133.4×ΔA÷W V 樣：加入樣本體積，5µL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本 蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量。