羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒 氨基酸代謝

產(chǎn)品名稱: 羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0250             產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣          產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：420
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡要介紹：
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
    樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP，進一補被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基ben甲醛反應，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃鹽酸：H₂O（V/V）= 1:1，室溫保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
    標準品：液體1mL×1支，0.5mg/mL 羥脯氨酸標準品，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP，進一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基ben甲醛反應，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。
試驗中所需的儀器和試劑：
天平、烘箱、玻璃管、離心機、水浴鍋、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
操作步驟：
一、羥脯氨酸提取
1. 組織：稱取約0.5g樣品于玻璃管，將組織盡量剪碎以便消化，蓋子稍松不密閉。加入5mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小時消化沒有可見大的團塊，16000rpm，25℃，離心20min（若離心后仍有雜質(zhì)，可通過過濾去除），用10mol/LNaOH（約3mL）調(diào)節(jié)pH值6～8范圍內(nèi)。蒸餾水定容8mL，取上清待測。（過程中可能有黑色物質(zhì)生成，若長時間不能消化，可能為碳化的物質(zhì)）
2. 細胞：取500萬個細胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小時消化透明狀，16000rpm，25℃，離心20min，用10mol/LNaOH（約0.5mL）調(diào)節(jié)pH值6～8范圍內(nèi)。蒸餾水定容2mL，取上清待測。
二、測定操作：

1. 將標準品稀釋為15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的標準溶液。
2. 按下表進行操作：

三、羥脯氨酸含量計算公式

1. 標準曲線的繪制：

以標準溶液的濃度為x軸，?A標準（?A =A標準管-A對照管）為y軸，繪制標準曲線，得到方程y=kx+b。將?A測定（?A =A測定管-A對照管）帶入方程得到x。

1. 羥脯氨酸含量的測定：

（1）按樣本鮮重計算：
組織羥脯氨酸含量（µg/g 鮮重）= x×V樣品÷（W×V樣品÷V組提）=8x÷W。
（2）按樣本蛋白濃度計算：
組織羥脯氨酸含量（µg/mg prot）= x×V樣品÷（Cpr×V樣品）=x÷Cpr。
（3）按細菌或細胞密度計算：
細胞羥脯氨酸含量（µg/10⁴ cell）= x×V樣品÷（細胞數(shù)量×V樣品÷V胞提）=2x÷細胞數(shù)量。
V樣品：加入的樣品體積，0.2mL；V組提：組織提取液體積，8mL；V胞提：細胞提取液體積，2mL；W：樣本鮮重；細胞數(shù)量：以10⁴計；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項：

1. OD值大于1，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2. 試劑有一定的毒性，請操作時做好防護措施，防止吸入或與皮膚接觸。

3、按樣本蛋白濃度計算時，需單獨提取樣本中的蛋白質(zhì)并測定。

 

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