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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測 糖代謝
貨號：BC0360
規(guī)格：50管/24樣
測試方法：可見分光光度法
產品內容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入3mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體42mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：粉劑×1支，4℃保存，含10mg無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1ml蒸餾水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液備用，4℃可保存1周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。
標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。
產品說明：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA 水解昆布多糖，內切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產生還原末端，通過測定還原糖生成速率，來計算其酶活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。
操作步驟：
粗酶液提取：
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL
提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標準管（葡萄糖溶液） |
樣本或標準液 | 100 | 100 | 100 |
蒸餾水 |
| 100 | 100 |
試劑一 | 100 |
|
|
充分混勻，放入37℃水浴60min。 | |||
試劑二 | 600 | 600 | 600 |
充分混勻，沸水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，540nm 處記錄各管吸光值A，
如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式乘以相應稀釋倍數），ΔA=A 測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
β-1,3-GA 活性計算：
根據標準管吸光度（x）和濃度（y，mg/ml）建立標準曲線，將ΔA帶入公式中計算出樣品中產生的還原糖的含量y值（mg/ml）
單位的定義：每mg 組織蛋白每小時產生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr
單位的定義：每g 組織每小時產生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細胞或細菌每小時產生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y
V1：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測 糖代謝訂購說明：
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