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還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒
測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

研究意義：
    GSH/GSSG 是細(xì)胞內(nèi)重要的氧化還原對(duì)之一。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)，也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一。此外，總谷胱甘肽（total glutathione, tGSH）含量還能夠反映細(xì)胞 γ-谷氨酰循環(huán)狀態(tài)。通過(guò)該試劑盒，可以獲得四個(gè)指標(biāo)，即 GSH 含量、GSSG 含量、總谷胱甘肽含量和 GSH/GSSG 比值。

測(cè)定原理：
    利用循環(huán)法測(cè)組織中總谷胱甘肽含量，2-VP 法測(cè) GSSG 含量?？偣入赘孰暮?GSH+2GSSG，該指標(biāo)與谷胱甘肽氧化還原循環(huán)無(wú)關(guān)，只與 γ-谷氨酰循環(huán)狀態(tài)，即 GSH 合
成和降解有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：
    可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1ml 比色皿、雙蒸水

試劑組成和配置：

試劑一×1 支；加雙蒸水 100ml，充分溶解，4℃保存，用于試劑二和試劑三溶解；
試劑二×1 支；加試劑一 11ml 充分溶解，4℃保存；
試劑三×1 支；臨用前，加試劑一 11ml 充分溶解；
試劑四×1 支，稀釋液四×1 支，臨用前，加 1ml 稀釋液四稀釋試劑四；
液體五×1 支；
試劑六×1 支，充分溶解于 50ml 雙蒸水；
GSH 標(biāo)準(zhǔn)品×1 支；臨用前，加雙蒸水定容 100ml，然后稀釋 10 倍，則為 10μmol/L；
GSSG 標(biāo)準(zhǔn)品×1 支；臨用前，加雙蒸水定容 100ml，然后稀釋 10 倍，則為 10μmol/L。
 

樣品前處理：
    稱(chēng)取約 0.1g 樣品，加 1ml 試劑六，冰上充分研磨， 8000rpm 4℃離心 10min，取上清。 （如上清不清澈，再離心 3min）

總谷胱甘肽含量測(cè)定：
    1、將試劑一于 25℃預(yù)熱 30min
    2、按下表操作

  加試劑四后，迅速混勻，于 412nm處測(cè)定吸光值，記錄 30s 和 150s 的數(shù)據(jù)，分別記為 A1、A2、A3 和 A4。

GSSG 含量測(cè)定:
    1、將試劑一于 25℃預(yù)熱 30min
    2、按下表操作

加試劑五后混勻， 于37℃水浴30min后， 取0.1ml溶液進(jìn)行下一步測(cè)定， 即下表中樣品0.1mL。

加試劑四后，迅速混勻，于 412nm 處測(cè)定吸光值，記錄 30s 和 150s 的數(shù)據(jù)，分別記為 B1、
B2、B3 和 B4。
tGSH 含量計(jì)算
tGSH（μmol/g）=（A4－A3）÷(A2－A1）×標(biāo)準(zhǔn)濃度（10μmol/L）×樣品測(cè)定前稀釋倍數(shù)
÷樣品質(zhì)量（g） ，
GSSG（μmol/g）=（B4－B3）÷(B2－B1）×標(biāo)準(zhǔn)濃度（10μmol/L）×樣品測(cè)定前稀釋倍數(shù)
÷樣品質(zhì)量（g） ，
GSH（μmol/g）=tGSH－2×GSSG。

注意事項(xiàng)：
    1、測(cè)定前請(qǐng)先用 1～2 個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如吸光值很高，則需用試劑六稀釋到適當(dāng)倍數(shù)，使得測(cè)定過(guò)程吸光值呈線(xiàn)性變化
    2、配制試劑以及樣品處理都需在低溫下，可置于冰上
    3、因?yàn)樘崛∵^(guò)程中去掉蛋白質(zhì)，所以提取液不能用于測(cè)定蛋白含量。如需測(cè)樣品的蛋白含
量，請(qǐng)事先將樣品分成兩份
    4、測(cè)定時(shí)也可將標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度后，制作成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，然后將測(cè)定樣品代入標(biāo)準(zhǔn)曲
線(xiàn)計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品配制的濃度一般不超過(guò) 20μmol/L

還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒