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            研域(上海)化學試劑有限公司

            簡單介紹細胞凍存的方法

            時間:2017-1-12閱讀:1260

            ?嗜多染紅細胞是分裂后期的紅細胞由幼年發(fā)展為成熟紅細胞的一個階段,此時紅細胞的主核已排出,因胞質內含有核糖體,Giemsa染色呈灰藍色,成熟紅細胞的核糖體已消失,被染成淡橘紅色。骨髓中嗜多染紅細胞數(shù)量充足,由于無核,極易觀察到微核,因此,骨髓中嗜多染紅細胞成為微核試驗的細胞群。
            細胞實驗原理
               染色單體或染色體的無著絲點斷片,或因紡錘體受損而丟失的整個染色體,在細胞分裂后期,仍然在細胞質中。末期之后,單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核,被包含在子細胞的胞質內,因比主核小,故稱為微核。大小應為主核的1/20~1/5。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣。微核率是和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關,所以可用簡易的、快速、靈敏的微核計數(shù)來代替繁雜的畸變染色體計數(shù)。Matter 和Schmid建立的微核測試是一種比較理想的方法,目前國內外已把微核測試用于輻射損傷、化學誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
            細胞凍存的方法:
            1.細胞:選對數(shù)生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。 
            2.計數(shù):按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液,計數(shù),令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。 
            3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。 
            4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。 
            5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。

             

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