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SNPs檢測方法
點擊次數(shù)：3223 發(fā)布時間：2011-3-8
SNPs檢測方法
定義
單核苷酸多態(tài)性（ single nucleotide olymorphisms ,SNPs），主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA 序列多態(tài)性。
SNPs的研究意義
遺傳標記
具有已知性、可遺傳性、可檢測性，用于疾病基因的定位、克隆和鑒定。
基因多態(tài)與疾病相關性
研究SNPs 本身對機體的影響，尤其是疾病的易感性、個性化醫(yī)療。
SNPs檢測方法的分類
1、測序方法：常規(guī)測序， Pyrosequencing（焦磷酸測序），微測序（SNaPshot）
2、基于雜交的方法：Taqman 探針法，Microarray 芯片法，
3、引物延伸：MALDI-Tof，dHPLC（變性液相色譜技術）
4、以構象為基礎的方法：RFLP，SSCP，DGGE
5、溶解曲線：HRM（高分辨率溶解曲線分析技術）
溶解曲線
1、溶解曲線----HRM技術
步驟：
序列比對---引物設計--- DNA 提取---熒光染料（EvaGreen 或LC green）PCR ---結果分析。
優(yōu)點：
高通量、簡單、快速、省錢、高靈敏度；
閉管檢測，避免污染造成的假陽性；
可檢測已知和未知SNP；<400bp擴增產(chǎn)物內SNP，靈敏度和度100%。
與傳統(tǒng)的擴增后需借助額外的儀器進行凝膠電泳的非均一性的突變檢測（例如dHPLC）相比，HRM提供了更高特異性和靈敏度的檢測，同時允許了更高的樣本檢測通量，大大降低了成本。
缺點：
如LightCyclerTM 480 PCR 儀，或LightScanner 等少量儀器可以使用。專業(yè)技術要求高，需要專業(yè)人員操作。
HRM檢測成本構成：
DNA提取費用；
PCR反應費用；
熒光染料Evagreen費用（較低）。
HRM檢測SNP特點：
檢測成本zui低；
*真正實現(xiàn)高通量的SNP檢測方法，人工成本zui低；
*閉管操作，步驟zui少，可靠性*