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HPLC進(jìn)樣方式有哪幾種
自動(dòng)進(jìn)樣器在色譜分析儀器中有著廣泛應(yīng)用，液相色譜系統(tǒng)大多使用自動(dòng)進(jìn)樣器引入樣品?，F(xiàn)在的色譜實(shí)驗(yàn)室，大都使用六通進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。
1、隔膜進(jìn)樣
用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi)，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎等于零，可以獲得的柱效，且價(jià)格便宜，操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng)，使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1～2%;加之能碉各種溶劑的橡皮不易找到，常規(guī)分析使用受到限制。
2、停流進(jìn)樣
可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點(diǎn)是保留時(shí)間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。
3、閥進(jìn)樣
一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥(以美國RHEODYNE公司的7725和7725I型常見)，其關(guān)鍵部件由圓形密封墊子(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積在存在，柱效率低于隔膜進(jìn)樣(約下降5～10%左右)，但耐高壓(35～40MPA)，進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好(0.5%)，操作方便。
六通閥進(jìn)樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。①用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%(多75%)，并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。此法進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性決定于注器取樣的熟練程度，而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬。②用*裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的 5～10倍9少3倍)，這樣才能*置換定量環(huán)內(nèi)和流動(dòng)相，消除管壁效應(yīng)，確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。
六通閥使用和維護(hù)注意事項(xiàng)：①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45UM濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的大壓力;轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。③為防止緩沖鹽和樣呂殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
4、自動(dòng)進(jìn)樣
用于大量樣品的常規(guī)分析。
液相自動(dòng)進(jìn)樣器做為客戶使用來說較關(guān)注的問題是：
1.定量是不是準(zhǔn)確?，F(xiàn)在方法驗(yàn)證特別多，基本都是外標(biāo)，所以進(jìn)樣準(zhǔn)確那是必須滴。
2.定位準(zhǔn)確。反復(fù)進(jìn)樣，一般半年左右是考驗(yàn)儀器的時(shí)候，半年過去了還那么準(zhǔn)確就說明是經(jīng)的住考驗(yàn)的，還有就是如果瓶子的位置放錯(cuò)，放重了，或是沒放，自動(dòng)進(jìn)樣器應(yīng)該有足夠的應(yīng)對出錯(cuò)，經(jīng)過調(diào)整后能依然準(zhǔn)確定位。
3.防殘留設(shè)計(jì)。無論采用什么技術(shù)，必須小的殘留，這要在洗針設(shè)計(jì)上下足功夫。
4.價(jià)格。
5.進(jìn)樣速度。簡捷的進(jìn)樣，快速洗針也要求越來越高。
6.防光照設(shè)計(jì)。
7.易于是清理及擦拭設(shè)計(jì)。
8.配套其它部件的設(shè)計(jì)及價(jià)格。