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3.2號(hào)上午我司接到來自福建農(nóng)林大學(xué)老師的：我想提取植物葉片總蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析，請(qǐng)問有什么簡便的方法嗎？

 

我司技術(shù)通過與客戶深入溝通了解后給予客戶以下兩條解答方法：

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法

1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。

2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。

3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4、提取上清液，樣品制備完成。

蛋白質(zhì)提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g。這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！

 

二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法（ 氯醋酸—丙酮沉淀法）

1、在液氮中研磨葉片

2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下放置一晚，然后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)）棄上清。

3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。

4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆?。藥品：提取液：?0%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！