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掌握兩點抗體選擇不再是難題
閱讀：1188 發(fā)布時間：2015-8-7不同的實驗使用的抗體也大為不同，根據(jù)試驗應(yīng)用的類型、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、樣本的種屬、抗體宿主的種類以及抗體的標記和檢測具體情況選擇zui符合實驗實際操作情況的單抗和二抗。恒遠總結(jié)一下兩點供廣大科研愛好者參考。
(一)動物的選擇
目前應(yīng)用zui廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應(yīng)用zui廣，因為所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘導出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的，雌雄均可，以8~12周齡為宜。
大白鼠也可，能產(chǎn)生較多量的單克隆抗體。現(xiàn)在已經(jīng)在小鼠雜交瘤的基礎(chǔ)上，發(fā)展了小鼠-大鼠，小鼠-人以及人-人雜交瘤技術(shù)。
(二)免疫
一般而言，抗原的純度不很重要，特別是免疫原性較強的抗原。
免疫程序、劑量和方法是關(guān)系到是否能得到所需要的單克隆抗體的關(guān)鍵之一。
正常小鼠脾臟含有能產(chǎn)生各種不同抗體的b淋巴細胞，一只純種小白鼠估計能產(chǎn)生1.0×107~5.0×107種不同的抗體。因此一只正常的小白鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤融合，只能有千萬分之一的機會獲得某一種特定抗體。所以為了提高得到某種雜交瘤的機會，必須加強免疫，使產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞大量增加。
B淋巴細胞的不同發(fā)育階段對獲得陽性雜交瘤也有很大影響。有人認為處在轉(zhuǎn)化時期的B淋巴細胞可能更易于融合，而免疫以后7~8天，雖然是抗體產(chǎn)生的高峰時期，但形成有活力的雜交瘤細胞的可能反而減少。故一般認為加強免疫后的第三天應(yīng)殺鼠取脾做細胞融合。
1.可溶性抗原(蛋白質(zhì)) 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗氏*佐劑乳化，分多點小鼠皮下注射，總量為0.3ml～0.6ml，間隔3～5周再同樣注射一次，10天后，斷尾取血一滴，測抗體效價，選滴度高的小鼠做融合試驗。一個月后可以經(jīng)靜脈(尾靜脈)給予無佐劑抗原0.2ml～0.4ml，3～4天后，殺死小鼠取脾做融合用。
2.顆粒性抗原 如抗原來源方便，可以不加佐劑而增加免疫次數(shù)，縮短間隔時間。例如用羊紅血球免疫小白鼠，以1%濃度每只皮下注射0.2ml，每周2次，共免疫5～8次，取脾前3天，再免疫一次即可。