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猴結核分枝桿菌抗體IgGELISA試劑盒
閱讀：635 發(fā)布時間：2017-4-28| 提 供 商 | 上海恒遠生物科技有限公司 | 資料大小 | 92.4KB |
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猴結核分枝桿菌抗體IgG(M.tuberculosis-IgG)ELISA試劑盒
使用目的：
本 試 劑 盒 用 于 測 定 猴 血 清 、 血 漿 及 相 關 液 體 樣 本 中 結 核 分 枝 桿 菌 抗 體
IgG(M.tuberculosis-IgG)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中猴結核分枝桿菌抗體 IgG(M.tuberculosis-IgG)表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中結核分枝桿菌抗體IgG(M.tuberculosis-IgG)相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中猴結核分枝桿菌抗體
IgG(M.tuberculosis-IgG)的存在與否。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
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2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
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3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
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4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
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5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
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6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
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標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
- 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1 孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
- 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
- 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
- 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
- 溫育：操作同 3。
- 洗滌：操作同 5。
- 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
- 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
- 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰 性 判 定 ： 樣 品 OD 值 < 臨 界 值 （ CUT OFF ） 者 為 結 核 分 枝 桿 菌 抗 體
IgG(M.tuberculosis-IgG)陰性陽 性 判 定 ： 樣 品 OD 值 ≥ 臨 界 值 （ CUT OFF ） 者 為 結 核 分 枝 桿 菌 抗 體
IgG(M.tuberculosis-IgG)陽性
。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月