狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

石蠟包埋組織DNA提取的基本方法
從石蠟包埋組織中提取DNA的基本步驟，是在常規(guī)DNA提取方法的基礎(chǔ)上改良和演變而業(yè)。Goelz等（1985）zui先提出的石蠟包埋組織DNA提取技術(shù)，是用機(jī)械的方法破碎組織，切除多余的石蠟，進(jìn)入含SDS和高濃度蛋白酶K（１mg/ml）的提取緩沖液加溫孵育，然后進(jìn)行苯酚和氯仿抽提。 所得DNA雖不完整，但可被限制性內(nèi)切酶切割，因而適于點(diǎn)雜交，印跡雜交等多種分了生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。Dubeau等（1986）在上述方法上作了改進(jìn)。 首先通過組織切片和二甲苯和脫蠟，保證了組織的*破碎，使細(xì)胞與消化液充分接觸，使DNA釋放和蛋白去除更加*；其次通過兩步消化的方法，將不適于做分子雜交的降解的DNA小段去除，僅保留那些可螺旋化的完整的DNA分子，從而提DNA質(zhì)量，適于做Sorthern印跡雜交分析。Moerkerk等（1990）對(duì)上述兩種方法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)兩種方法所提行DNA之點(diǎn)雜交結(jié)果一致，非螺旋化DNA亦不影響雜交分析。
Goelz氏DNA提取方法的主要步驟
.切除多余石錯(cuò)，暴露組織
.將組織切碎（zui大徑<0.5mm），稱重；
3.溶于TE9提取液（組織<50mg/5ml.50－500mg/10ml）,高速混懸2－3min，于48℃放置24h
ＴＥ９提取液的制備
500mmol/L Tris
20mmol/L EDTA
10mmol/L NaCl
1％ SDS
500 μg/ml 蛋白酶Ｋ
pH8.0
4.再次混懸組織，加入蛋白酶Ｋ至終濃度１mg/ml，SDS至２％，孵育40h；
5.用等體積酚－氯仿溶液抽提３次；
6.2.5倍體積乙醇沉淀DNA
7.-70℃放置２－４h
8.9 000xg離心１h
9.沉淀物用70％乙醇洗１次
0.干燥，TE（pＨ7.2）溶解。
　　不同類型的基因分析所要求的DNA質(zhì)量和數(shù)量不同。Southern 印跡雜交分析需要10－15μg大片段DNA（>20kb），因?yàn)殡s交前要進(jìn)行相誚的限制性內(nèi)切酶消化和凝膠分離不同片段長(zhǎng)度的DNA。故DNA提取要求高，小片段DNA存在會(huì)直接影響雜交信號(hào)。與之相反，多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）則可在相對(duì)粗制的小片段DNA存在會(huì)直接影響雜交信號(hào)。與之相反，多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）則可在相對(duì)粗制的小片段DNA樣本上進(jìn)行，分析所需的DNA很少，0.5μg甚至更少即可。PCR的模板DNA制備方法很多，除上述兩種方法外，還有更簡(jiǎn)便的直接水煮法（Slebos,et al,1990；Smit, et al, 1988 ）、 蛋白酶消化法（Impraimet al.1987；Brice,et al.1989）。
這些方法不經(jīng)過酚－氯仿－異戊醇抽提、DNA純化等步驟，直接將組織放在去離子水中煮沸10min 或在蛋白酶Ｋ緩沖液中消化４h，DNA即可釋放出來(lái)。此提取物可直接用作模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增， 但是，我們發(fā)現(xiàn)直接水煮法和蛋白酶消化法提取的DNA，擴(kuò)增率較低，且征對(duì)性不好。這可能是由于DNA附著的蛋白質(zhì)去除不凈而影響DNA變性和與引物的結(jié)合，亦可能是由于標(biāo)本中殘留的固定劑等成分對(duì)Taq DNA多聚酶的抑制所致。

  上海恒遠(yuǎn)生物先后與河南中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、同濟(jì)大學(xué)、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、仁濟(jì)醫(yī)院、曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標(biāo)本齊全,有專門針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒；另有針對(duì)各種動(dòng)物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚）的科研試劑。