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植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的幾種方法
閱讀：1182 發(fā)布時間：2011-8-10
植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的幾種方法
| （1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法 將外植體放入含有外源基因的農(nóng)桿菌（Agrobacteriumtume／ociens）菌液中浸泡，然后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基誘導(dǎo)抗性愈傷組織和抗性芽，生根后的抗性植株移栽至營養(yǎng)缽生長。 （2）基因槍法 又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金?；蜴u粒表面，然后在高壓的作用下，微粒被高速射入受體細胞或組織，微粒上的外源DNA進入細胞后，整合到植物染色體上，得以表達，從而實現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化。 （3）花粉管通道法 在植物授粉時將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導(dǎo)入受精卵細胞，并進一步地整合到受體細胞的基因組中，隨著受精卵的發(fā)育而成為含轉(zhuǎn)基因的新個體。該方法于80年代初期由我國學者周光宇提出。我國目前推廣面積zui大的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的zui大優(yōu)點是不依賴組織培養(yǎng)人工再生植株，技術(shù)簡單，不需要裝備精良的實驗室，常規(guī)育種工作者易于掌握。 （4）微注射法 首先制備植物原生質(zhì)體，游離出細胞，在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下，將目的基因DNA通過微管注射到受體細胞中。 （5）電穿孔法 在短時間的高壓直流電脈沖的沖擊下，可以使原生質(zhì)膜的分子疏松，形成暫時性的直徑為3～4nl-n的小孔，但對原生質(zhì)體生活力影響不大。這時，存在于原生質(zhì)體周圍溶液中的外源DNA，就可以通過這種小孔進入原生質(zhì)體，實現(xiàn)基因的直接轉(zhuǎn)移。 （6）微束激光打孔法 原生質(zhì)體在短時間的微束激光照射下，可在質(zhì)膜表面形成面積約0．25Pm2左右的小孔，使DNA分子進入細胞。 |