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上海凱朗儀器設(shè)備廠
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二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞的作用
2017-3-23 閱讀(766)
二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞的作用
原代培養(yǎng)的細胞會不可避免地存留少量異質(zhì)細胞一同生長．為了后續(xù)實驗結(jié)果的針對性和準確性，一般都需要對培養(yǎng)物進行純化。純化神經(jīng)元的方法有很多種，zui簡便及常用的是采用有絲分裂抑制劑阿糖胞苷來抑制異質(zhì)細胞的存活和生長。神經(jīng)元的分化增殖完成于胚胎期，大部分神經(jīng)元在出生后即為*的分裂后細胞，但其他細胞則仍然不斷地進行分裂增殖，使用有絲分裂抑制劑后，非神經(jīng)元的細胞生長會受到抑制及淘汰，神經(jīng)元由此得到純化實驗材料：Hanks液，DMEM培養(yǎng)基10ml，有刻度吸管兩只，彎頭吸管兩只，無刻度吸管一只，新生乳鼠（24小時）0.05%胰酶，1%雙抗，10%胎牛血清，培養(yǎng)皿，小燒杯，空的離心管，鑷子，剪刀，酒精燈，酒精棉，實驗前準備工作：肥皂洗手，新吉爾滅擦手，開通風柜，將吸管從套筒中取出放入各自對應(yīng)的試管內(nèi)，將橡皮塞安裝到各自吸管上，酒精燈分別迅速灼燒，1配液Hanks液近40ml加1%雙抗1ml，加完雙抗的小吸管留作計數(shù)，在DMEM培養(yǎng)基中加10%胎牛血清（已配好，全部加入），從離心管取一滴碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至溶液呈紫色，一離心管0.05%胰酶，
取材。乳鼠新生24小時。3，洗滌剪碎，在培養(yǎng)皿中加入少許Hanks液洗滌，將乳鼠頭部用酒精棉擦拭消毒，在乳鼠頭部位置剪一個工字型切口，將皮膚顱骨沿著切口依次剪開剝離，取出大腦組織，并去除乳鼠的血管腦膜，用彎頭吸管將Hanks液與剝離干凈的腦組織移走到另一個干凈的培養(yǎng)皿中，用彎頭吸管洗走洗液，彎頭吸管將含有腦組織的Hanks移入到小燒杯中剪碎，每個組織塊近似一立方毫米，靜置后洗走上面的Hanks液，（吸取Hanks液時勿將下面的組織塊洗走），同樣方法再用Hanks液洗滌一次4．酶解，加一離心管0.05%胰酶，將上述小燒杯中的組織液移入空置的離心管中，37攝氏度水浴10分鐘，觀察組織塊是否變小，靜置2分鐘，使組織沉淀下來，棄掉上請胰酶后，加DMEM培養(yǎng)基（全部倒入）來中和胰酶，吹散組織液5.離心1200轉(zhuǎn)每分鐘，離心5分鐘，棄掉上清液，沉淀后加Hanks液吹散重懸組織液，用同樣的轉(zhuǎn)速和時間在離心一次，加*培養(yǎng)基3-4mL吹散，靜置1分鐘，以便消化大塊組織6.計數(shù)，取0.1ml離心后的細胞液加入苔盤藍染色，加樣搶加0.1微升與計數(shù)板計數(shù)，同時剩余細胞液加入培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)接種，標注好組別和時間，培養(yǎng)細胞的名稱37攝氏度，二氧化碳培養(yǎng)箱中，下周實驗課觀察細胞培養(yǎng)情況。
