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化學(xué)法轉(zhuǎn)染技術(shù)已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞的穩(wěn)定或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,那么你知道不同化學(xué)轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)是什么嗎?讓我們一起來看看吧!
一、陽離子脂質(zhì)體
優(yōu)點(diǎn):
1.操作快速簡單。
2.結(jié)果可重復(fù)。
3.轉(zhuǎn)染效率高。
4.可轉(zhuǎn)染DNA,RNA和蛋白質(zhì)。
5.適用于生產(chǎn)瞬時(shí)和穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。
6.可用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染。
缺點(diǎn):
1.需進(jìn)行條件優(yōu)化(一些細(xì)胞系對(duì)陽離子脂質(zhì)體較敏感)。
2.有些細(xì)胞系不容易轉(zhuǎn)染。
3.血清的存在干擾復(fù)合物的形成,導(dǎo)致低轉(zhuǎn)染效率。
4.培養(yǎng)基中血清的缺失會(huì)增加細(xì)胞毒性。
二、磷酸鈣共沉淀
優(yōu)點(diǎn):
1.便宜且容易獲得。
2.適用于生產(chǎn)瞬時(shí)和穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。
3.轉(zhuǎn)染效率高(不限制細(xì)胞系)。
缺點(diǎn):
1.需要仔細(xì)制備試劑 – CaPO4溶液對(duì)pH,溫度和緩沖鹽濃度的變化敏感。2.可重復(fù)性較差。
3.有細(xì)胞毒性,尤其對(duì)原代細(xì)胞。
4.不能采用RPMI培養(yǎng)基,由于其含高濃度的磷酸鹽。
5.不適用于動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染。
三、葡聚糖:
優(yōu)點(diǎn):
1.操作簡單。
2.結(jié)果可重復(fù)。
3.便宜。
缺點(diǎn):
1.對(duì)某些細(xì)胞有化學(xué)毒性。
2.只限于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
3.轉(zhuǎn)染效率低,尤其在原代細(xì)胞中。
四、其他陽離子聚合物
優(yōu)點(diǎn):
1.在血清中穩(wěn)定,對(duì)溫度不敏感。
2.高轉(zhuǎn)染效率(限制細(xì)胞系)。
3.結(jié)果可重復(fù)。
缺點(diǎn):
1.對(duì)某些細(xì)胞有毒性。
2.不能生物降解(樹枝狀大分子)。
3.只限于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
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