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上海源葉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： S30260異硫氰酸胍,30259鹽酸胍,嗜熱菌蛋白酶 |
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乳膠顆粒凝集試驗(yàn)（LPAT）檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素
2011-5-14 閱讀(701)
由Finkelstein等建立，方法如下。
①乳膠敏化 取lOlL羊抗人源LT-I血清與19Oμl pH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻，再加等體積乳膠制劑，混勻，37℃水浴孵育2h，每15min振搖1次，然后加入用上述緩沖液稀釋的O．1％牛血清白蛋白600uL，3Orain而后即可使用。
②待檢菌液制備 從MacC或EMB或；HE等瓊脂上挑取待檢菌落，在裝有3Ortl的20000U／ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液，37℃水浴溫育5～3Omin（視菌液濃度而定），離心沉淀細(xì)胞，上清液待檢。
③正式試驗(yàn) 在玻片上加10uL待檢上清和5,aL致敏乳膠，混勻，輕輕搖動(dòng)3min，在斜射光下觀察結(jié)果，判定標(biāo)準(zhǔn)同一般凝集試驗(yàn)。如用抗LT全血清致敏乳膠，檢測敏感性為印g／m1的LT；若以親和層析純LT抗體敏化乳膠，其靈敏度可達(dá)O．O32ug／m1的LT，且無假陽性結(jié)果。本法還能檢測豬源LT-1。Scotland等用這類商品化試劑盒檢測了1OO株大腸桿菌，其結(jié)果與Y1細(xì)胞法*吻合。
Honda等已報(bào)道用LT抗體致敏的葡萄球菌凝集試驗(yàn)宋檢測LT，其原理與上法相似。
