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上海源葉生物科技有限公司
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環(huán)狀沉淀反應(yīng)
2012-8-4 閱讀(1346)
以炭疽環(huán)狀沉淀反應(yīng)為例，此反應(yīng)又稱Ascoli氏反應(yīng)。
（一）材料與試劑
1．已知炭疽沉淀血清，購買自生物制品所。
2．待測炭疽沉淀抗原
3．試管5mm×50mm、滴管
4．0.3%石炭酸生理鹽水
（二）操作方法
1．待測抗原的提取
（1）取可疑為炭疽而死的病畜的實(shí)質(zhì)臟器1g，放入試管或小三角燒瓶中，加生理鹽水5ml～10ml，煮沸30min～40min，冷卻后用濾紙過濾得清澈的液體，即為待測抗原。
（2）如病料是皮張，可采用冷浸法。將樣品高壓滅活后，剪成小塊并稱重，加約5倍的0.5%生理鹽水，室溫浸泡18h～24小時(shí)，濾紙過濾，即為待檢抗原。
2．取試管5支（5mm×50mm）置于試管架上，編號。第1、2試管內(nèi)加炭疽沉淀血清，第3、4試管內(nèi)加正常血清，第5管內(nèi)加待檢抗原，分別用毛細(xì)滴管加至4mm～5mm。
3．第1、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液，第2、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞，可將小試管從試管架取出，微傾斜，沿試管壁加入緩沖液或抗原。
4．在試管架上靜置數(shù)分鐘，觀察結(jié)果。
（三）結(jié)果判定
第2管內(nèi)兩液界面出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀帶，其余管無此種沉淀帶判為陽性。
（四）注意事項(xiàng)
1．反應(yīng)物必須清澈，如不清澈，可離心，取上清液或冷藏后使脂類物質(zhì)上浮，用吸管吸取底層的液體。
2．必須進(jìn)行對照觀察，以免出現(xiàn)假陽性。
3．采用環(huán)狀沉淀反應(yīng)，用以沉淀素效價(jià)滴定時(shí)，可將抗原做100×，1 000×，2 000×，4 000×，8 000×等稀釋，分別疊加于抗血清上，以出現(xiàn)環(huán)狀沉淀的zui大稀釋倍數(shù)，即為該血清的沉淀素效價(jià)。
