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上海源葉生物科技有限公司
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sigma弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑說明書
2012-9-22 閱讀(667)
sigma弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑說明書
一、定義：
弗氏佐劑（Freundadjuvant）,這是目前zui常用于動物實驗的佐劑，它是將抗原水溶液與油劑（石蠟油或植物油）等量混合，再加乳化劑（羊毛脂或葉吐溫80）制成油包水抗原乳劑，稱之為不*弗氏佐劑。如在不*佐劑中加入分枝桿菌（如死卡苗）則稱為*弗氏佐劑。
二、制備方法：
弗氏佐劑是現(xiàn)在動物實驗中zui常用的佐劑，分為不*弗氏佐劑和*弗氏佐劑。不*弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據(jù)需要而定，通常為2：1。不*佐劑中加卡介苗（zui終濃度為2～20mg/ml）或死的結(jié)核分枝桿菌，即為*弗氏佐劑（FCA）。一般注射時用1／2體積FCA加上1／2體積的抗原進行乳化，第二次或第三次注射時用不*佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi)，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存?zhèn)溆谩?br />
在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成"油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復合物，注射入動物體內(nèi)時一定要保持乳化狀態(tài)?？乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉游锊煌幸欢ú町?，無統(tǒng)一標準和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，zui多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行：
（1）研磨法：先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內(nèi)，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續(xù)研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。
（2）注射器混合法：將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內(nèi)，兩注射器之間以一細膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化*，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化*，為合格的油包水劑。
（3） 超聲：實驗室條件好點的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發(fā)一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。
三、其他免疫佐劑的物質(zhì)
弗氏佐劑也屬于免疫佐劑。其他免疫佐劑的物質(zhì)有：①微生物及其產(chǎn)物，常用的微生物有分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖，自分枝桿菌的提取物質(zhì)胞壁酰二肽等。②多聚核苷酸，如多聚肌苷酸：胞苷酸（poly1:C）,多聚腺苷酸（poly1:A：μ）等;。③無機物，如明礬及氫化鋁等。
佐劑的作用機制尚不*清楚：①它可能增加抗原的表面面積，易為巨噬細胞所吞噬；②延長抗原在體內(nèi)的存留期，增加與免疫細胞接觸的機遇；③誘發(fā)抗原注射部位及其局部淋巴結(jié)的炎癥反應，有利于刺激免疫細胞的增殖作用。
四、區(qū)別：
弗氏不*佐劑
產(chǎn)品簡介：弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液，含結(jié)核分枝桿菌的細胞壁成分。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放，并刺激局部免疫反應。弗氏不*佐劑用于初次免疫刺激。為了減少副作用，不含結(jié)核分枝桿菌成分的弗氏不*佐劑用于加強免疫。
弗氏*佐劑
產(chǎn)品簡介：弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液，能夠非常有效的誘導產(chǎn)生高滴度的抗體。弗氏*佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細胞壁成分，可以加強對抗原的抗體反應。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放，并刺激局部免疫反應。
五、儲存：
儲存在低溫，通風的區(qū)域。
