總抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）

試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液

及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測(cè)定原理

在酸性環(huán)境下，物質(zhì)還原Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe²⁺-TPTZ的能力反映了其總抗氧化能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。

試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，避光保存。

樣品的制備

(1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品

血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超30 d）后再測(cè)定。

(2) 組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

(3) 細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

操作步驟

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，使用前預(yù)溫至 37℃ 。

注意：空白管只需測(cè)定一次。

總抗氧化能力計(jì)算

1. 定義：樣品的抗氧化能力以達(dá)到同樣吸光度變化值（△A）所需的標(biāo)準(zhǔn)液離子濃度表示。

標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y=0.6308 x +0.1291，R²=0.9989

2. 計(jì)算公式：

(1)按蛋白濃度計(jì)算

總抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣× Cpr）

=53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr

(2)按樣品質(zhì)量計(jì)算

總抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）

=53.9×（△ A-0.1291）÷ W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

總抗氧化能力（U/10⁴ cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）

(4)按液體體積計(jì)算

總抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反總÷V 樣

=53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr

V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應(yīng)總體積，1.02mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，

0.03mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)

1. 試劑二對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并

戴乳膠手套操作。

2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對(duì)本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生

干擾。

3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反

應(yīng)的還原劑。

4. 如果樣品測(cè)定出來的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍以外，需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進(jìn)行測(cè)

定。

5. 試劑盒 2-8℃保存。

線粒體復(fù)合體Ⅳ試劑盒說明書