核酸品質(zhì)PC 抽提
PC 抽提是去除氨基酸的一個十分管用的手眼。苯酚能使氨基酸改變性別,改變性別后的氨基酸從水相中被析出,處于苯酚中還是苯酚/水相之間。
PC 抽提的關(guān)鍵是,一要混勻*,二要用量足夠。*混勻,能力保證苯酚與氨基酸的充分接觸,使氨基酸改變性別。人們老是擔(dān)心混勻的猛烈程度是否會對核酸,特別是基因組DNA 導(dǎo)致毀傷,其實(shí)大可不需要這么謹(jǐn)慎。猛烈的混勻操作,是會對局部打斷大分子的基因組DNA ,但該毀傷效用不會猛烈到DNA 成為10kb 以內(nèi)的小斷片。恒溫培養(yǎng)箱
手猛烈忽悠混勻后,基因組DNA 的斷片,大多會大于20kb,這個體積,除開一點(diǎn)尤其的要求外,對PCR 和酶切,都是適合使用的。假如要求的斷片很大,如構(gòu)建文庫用,則不可以運(yùn)用猛烈的混勻辦法,而只能往返柔和顛倒混勻―此時的關(guān)鍵是:裂解液的比例要足夠大,生化培養(yǎng)箱使整體體系不要太粘稠。
用量要足夠,是由于苯酚去除氨基酸是有一定的達(dá)到zui高限度度的。超過了該達(dá)到zui高限度度,裂解整體體系中的氨基酸不會被一次去除,務(wù)必靠多次抽提,方可*去除。額外,整體體系太粘稠的害處是,氨基酸難于*去除,以及DNA 會斷開得更利害,培養(yǎng)箱 所以要注意裂解液與樣品的比例。