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2012-6-4 閱讀(1290)
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測(cè)定
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測(cè)定。
2 規(guī)范性引用文件
本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是*的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3 原理
試樣中的脂肪用溶劑提取。提取物在堿性條件下與甲醇反應(yīng)生成脂肪酸甲酯，用配有氫火焰離子化檢測(cè)器的氣相色譜儀分離順式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外標(biāo)法定量。
4 試劑和材料
除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
4.1 石油醚：沸程 30 ℃～60 ℃。
4.2 乙 mi（C4H10O ）。
4.3 乙 chun（C2H6O ）：體積分?jǐn)?shù)為95 % 。
4.4 正己烷（C6H14 ）：色譜純。
4.5 氨水（NH3·H2O ）：25 %～28 % 。
4.6 氫氧化鉀（KOH ）。
4.7 甲醇（CH4O ）。
4.8 淀粉酶：活力單位：1.5 U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)整用量。
4.9 無(wú)水硫酸鈉（Na2 SO4 ）。
4.10 氫氧化鉀- 甲醇溶液（4 mol/L ）：稱(chēng)取26.4 g 氫氧化鉀，溶于約 80 mL 甲醇中。冷卻至室溫，用甲醇定容至 100 mL，加入約 5g 無(wú)水硫酸鈉（4.9 ），充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾，保留濾液。
4.11 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品：十八酸甲酯（C18:0 ）、反-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t ）、順-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9c ）、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t，12t）、順-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9c，12c），放入冰箱在-15 ℃以下保存。
4.12 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液：濃度分別為 10.0 mg/ mL。稱(chēng)取500 mg （到0.1 mg ）反-9-十八碳一烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品和反-9，12-十八碳二烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，分別用正己烷溶解并定容至 50.0 mL 。放入冰箱在-15 ℃以下保存。
4.13 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液：濃度分別為 1.0 mg/ mL。分別吸取兩種反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.12 ）10.0 mL 入同一 100 mL 容量瓶中并用正己烷（4.4 ）定容。臨用前配制。亦作為標(biāo)準(zhǔn)曲線zui高點(diǎn)。
4.14 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用前配制。分別吸取反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.13 ），0、2.0 、4.0 、6.0、8.0、10.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，此濃度即為 0、0.2、0.4、0.6、0.8 、1.0 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
4.15 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合液：將脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品（4.11 ），用正己烷配制成脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，其中每種成分的濃度約為 0.05 mg/mL 至 0.5 mg/mL 。用于進(jìn)行順?lè)粗舅峒柞シ蛛x程度及定性的鑒定。
4.16 剛果紅溶液：稱(chēng)取 1 g 剛果紅溶解稀釋至 100 mL。
5 儀器和設(shè)備
5.1 氣相色譜儀，帶氫火焰離子化檢測(cè)器。
5.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。
5.3 恒溫水浴：40 ℃～80 ℃。
5.4 渦旋振蕩器。
5.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000 轉(zhuǎn)/分鐘。
5.6 毛氏抽脂瓶。
5.7 毛氏抽脂瓶搖混器。
5.8 脂肪收集瓶：圓底燒瓶，與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀配套。
5.9 天平：感量為 0.1 mg 。
6 分析步驟
6.1 試樣處理
6.1.1 含淀粉的試樣：稱(chēng)取混合均勻的固體試樣約 1.5 g，液體試樣約 5 g（到0.1 mg ）于毛氏抽脂瓶中，加入約 0.1 g 淀粉酶（酶活力 1.5 U/mg），混合均勻后，加入 8 mL～10 mL 45 ℃±2 ℃的水搖勻。蓋上瓶塞置于 55 ℃±2 ℃水?。?.3 ）中2 h ，每隔 10min 搖混一次。加入兩滴約 0.1 mol/L 的碘溶液，檢驗(yàn)淀粉是否水解*。若無(wú)藍(lán)色出現(xiàn)，則水解*，否則將毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至藍(lán)色消失，取出冷卻至室溫。
6.1.2 不含淀粉的試樣：稱(chēng)取混合均勻的固體試樣約 1.5 g，液體試樣約 10g （到0.1 mg ）于毛氏抽脂瓶（5.6 ）中，加入 10 mL 45 ℃±2 ℃的水，將試樣洗入毛氏抽脂瓶（5.6 ）的小球中，充分混合，直到試樣*散開(kāi)，冷卻至室溫。
6.1.3 脂肪的提取：向毛氏抽脂瓶（5.6 ）中加入3.0 mL 氨水（4.5 ），混勻。置于60 ℃±2 ℃水浴（5.3 ）中 15 min～20 min ，冷卻至室溫。加入 10 mL 乙chun（4.3 ）和 1 滴剛果紅溶液（4.16 ），混勻。再加入25mL 乙mi（4.2 ），塞上軟木塞，放到毛氏抽脂瓶（5.6 ）搖混器上震蕩 1 min，也可采用手動(dòng)振搖方式，再加入 25mL 石油醚 （4.1 ），震蕩 1 min，不低于 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心分層。傾出上清液于脂肪收集瓶 （5.8 ）中，為*次提取。在剩余試樣液中再加入 5 mL 乙chun，25 mL 乙mi，25 mL 石油mi按上述操作步驟進(jìn)行第二次提取。用離心機(jī)（5.5 ）離心分層后傾出上清液與*次的上清液合并。將脂肪收集瓶（5.8 ）置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（5.2 ）上，在60 ℃±2 ℃通入氮?dú)鈼l件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，保留殘?jiān)?，即為脂肪?/p>
6.1.4 脂肪酸甲酯的制備：將上述脂肪用正己烷（4.4 ）溶解并定容至 10.0 mL，取出 3.0 mL 于 10 mL具塞試管中，加入 0.3 mL 氫氧化鉀- 甲醇溶液（4.10 ）。蓋緊瓶蓋，渦旋振蕩器（5.4 ）上劇烈振搖2 min ，4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 5 min 后將上清液轉(zhuǎn)入氣相色譜試樣瓶中，此為試樣測(cè)定液。
6.2 測(cè)定
6.2.1 參考色譜條件
色譜柱：填料為氰丙基芳基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱，柱長(zhǎng)100 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.2 µm；或同等性能的色譜柱。
進(jìn)樣口溫度：250 ℃；載氣（Ｎ2）。
檢測(cè)器溫度：300 ℃。
分流比：10：1。
進(jìn)樣量：1.0 μL 。
上海凱朗儀器設(shè)備廠主要生產(chǎn)：生化培養(yǎng)箱,霉菌培養(yǎng)箱,光照培養(yǎng)箱,人工氣候箱,恒溫恒濕,低溫生化培養(yǎng)箱,恒溫培養(yǎng)振蕩器（搖床）系列及光照恒溫培養(yǎng)搖床系列和高低溫試驗(yàn)箱，高低溫恒定濕熱試驗(yàn)箱，高低溫交變濕熱試驗(yàn)箱，高低溫沖擊試驗(yàn)箱，溫度快速變化試驗(yàn)箱，鹽霧腐蝕試驗(yàn)箱，老化試驗(yàn)箱，真空、鼓風(fēng)、高溫干燥箱等各種環(huán)境類(lèi)試驗(yàn)設(shè)備。
