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萊姆Lyme酶免試劑盒（ELISA）說明書
點(diǎn)擊次數(shù)：2036 發(fā)布時(shí)間：2019-7-24
萊姆Lyme酶免試劑盒（ELISA）
廣州健侖生物科技有限公司
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【產(chǎn)品名稱】：萊姆病抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
1、用途: 本試劑盒用于定性/定量檢測血清或血漿中抗萊姆氏IgG抗體, 可以檢測所有萊姆氏螺旋菌亞型的感染
2、簡介: 萊姆病是一種蟬傳螺旋體感染性疾病。萊姆病的病原體為萊姆病螺旋體，能引起人類慢性游走性紅斑，以及心臟、神經(jīng)和關(guān)節(jié)等多系統(tǒng)受累的疾病，對人群健康危害較嚴(yán)重。萊姆病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要是血清學(xué)方法。本試劑盒采用特異性萊姆氏螺旋菌三個(gè)亞型的混合抗原進(jìn)行微孔板包被,具有較高的檢測靈敏度和特異性。
3、檢測原理：采用夾心ELISA方法，將萊姆氏螺旋菌抗原包被于微孔板底部，檢測時(shí)，稀釋樣本及試劑盒質(zhì)控品加入微孔板，樣本中的抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體與抗原結(jié)合，經(jīng)過孵育，洗滌，加入HRP標(biāo)記的抗人IgG二抗，在經(jīng)過孵育，洗滌后加入HRP酶的底物顯色劑TMB，終止顯色，酶標(biāo)儀讀板，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或者Cutoff值判斷樣本的陰陽性。
4、注意事項(xiàng)和預(yù)防措施
1） 此試劑盒僅用于體外診斷和專業(yè)人士使用。
2） 在檢測開始之前，仔細(xì)和完整的閱讀說明書，使用試劑盒提供的包裝插件的有效版本， 確保所有的程序都清楚。
3） 檢測時(shí)請不要使用已被損害的試劑，以確保自身安全。
4） 按照批號和有效期，不混合使用不同批號的試劑，也不要使用過期的試劑。
5） 遵守好的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則和安全指南。穿實(shí)驗(yàn)服，帶橡皮手套，有必要時(shí)請戴護(hù)目鏡。
6） 此試劑盒中含有會傷害眼睛和皮膚的有害試劑。請閱讀材料來源和標(biāo)簽獲取詳細(xì)信息。
7） 根據(jù)國家生物有害物質(zhì)及安全條例，所有化學(xué)藥品和準(zhǔn)備或使用過的試劑都應(yīng)當(dāng)做有害物質(zhì)進(jìn)行處理。
8） 避免接觸終止液，以免刺激或著燒皮膚。
9） 試劑盒中的所有試劑（包括檢測過的人血清/血漿）對HIV/II,HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性,但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II,HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除.因此,所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理
5、貯存與穩(wěn)定性
試劑盒和運(yùn)輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的包被板條在三個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定，前提是將包被板條用袋子密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下。
6、樣品的采集與貯存
血清/血漿（EDTA抗凝）
按照一般原則進(jìn)行靜脈采血。自樣品采集到檢測都應(yīng)保持血液樣品的完整性。不要使用易容血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將其離心以除去顆粒物質(zhì)。 | |||
貯存 | 2-8℃ | ≤-20℃（分裝凍存） | 避免高溫和太陽直射，避免反復(fù)凍融。 |
穩(wěn)定性 | 5天 | 12個(gè)月 | |
7、試劑盒組份
1×12×8 | MTP | 包被板，可拆，微孔中包被了特異性抗原。 |
1×12mL | ENZCONJ | 酶聯(lián)結(jié)合物，綠色，即用性，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體 |
4×1.5mL | CONTROL A-D | A-D標(biāo)準(zhǔn)品: 含量為: 2; 10; 50; 200 U/mL，其中標(biāo)準(zhǔn)品B作為Cutoff標(biāo)準(zhǔn)品,內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體，穩(wěn)定劑 |
1.5mL | CONTROL+ | 陽性質(zhì)控，即用，內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體，穩(wěn)定劑 |
1.5mL | CONTROL- | 陰性質(zhì)控，即用，內(nèi)含人血清和穩(wěn)定劑。 |
1×100mL | DILBUF | 稀釋用緩沖液，藍(lán)色，內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑、BSA和穩(wěn)定劑 |
1×100mL | WASHBUF | 洗滌液（10×），內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑和穩(wěn)定劑。 |
1×12mL | TMB SUBS | TMB底物液，即用，內(nèi)含TMB。 |
1×12mL | TMB STOP | TMB終止液，即用，含1M H2SO4 |
8、實(shí)驗(yàn)所需器材（但試劑盒不提供）
1） 移液器（Eppendorf移液器或類似儀器,CV＜3%），體積為5μL；100μL；1000μL
2） 漩渦混勻器
3） 37℃孵箱
4） 樣品稀釋用試管（1mL）
5） 帶有儲器的8道移液器。
6） 洗滌瓶，自動或半自動的包被板洗滌設(shè)備。
7） 可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀（參考波長：600-650nm）
8） 雙蒸水或去離子水
9） 坐標(biāo)紙，取樣吸頭，記時(shí)器。
9、實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)
1） 樣品處理不合理或?qū)?shí)驗(yàn)操作進(jìn)行任何改動動都會影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。取樣體積、溫育時(shí)間、欲處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進(jìn)行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)移液器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。
2） 一旦實(shí)驗(yàn)開始，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去，不允許中斷。把所有試劑和樣品都拿到18-25℃的實(shí)驗(yàn)室中，在使用前，輕輕搖動液體試劑和樣本，試劑混合過程中要避免氣泡。
3） 請勿接觸試劑、移液器、微孔/試管。加試劑和樣本時(shí)，請使用新的取樣吸頭，以避免交叉污染。不用的試劑應(yīng)用蓋子蓋好，以免重復(fù)使用。
4） 用定標(biāo)儀對反應(yīng)板進(jìn)行校準(zhǔn)。
5） 溫育時(shí)間會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。微孔加樣的順序和時(shí)間都必須一致。建議使用8道移液器加樣。
6） 包被板的清洗非常重要，微孔清洗不好將會形成錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議使用多道移液器或自動微孔清洗設(shè)備進(jìn)行清洗。每次溫育間隔期間避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時(shí)要避免碰到包被孔。清洗和加試劑時(shí)都應(yīng)特別小心。清洗時(shí)，在微孔中的加入洗滌液緩沖液，同時(shí)確保無微孔中無殘?jiān)?/span>
7） 濕度會影響包被板，所以在未到達(dá)室溫時(shí)請勿打開包裝，未使用的包被板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。
8） 此實(shí)驗(yàn)也可以在自動操作系統(tǒng)上進(jìn)行，具體信息請見“性能”。
10、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明
10.1成分的準(zhǔn)備
稀釋/溶解 | 成分 |
| 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 有效期 |
100mL | 洗滌液 | 1000mL | 雙蒸水 | 1：10 | 有必要的話,加熱至18-25℃以溶解所有結(jié)晶 | 2-8℃ | 2-3月 |
10.2樣本稀釋
10.2.1 血清/血漿樣本
樣本 | 稀釋 | 試劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:101 | 10 μL樣品 + 1 mL 稀釋緩沖液 |
樣品中IgG濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)品含量的樣品必須進(jìn)一步稀釋，并重復(fù)檢測。
10.2.2 腦脊液樣本:按照Reiber法進(jìn)行腦脊液檢測時(shí),有必要用使血清和腦脊液具有相同的濃度或相同的Cutoff判別范圍（OD值為1-0.1）,通過下面方式稀釋可以實(shí)現(xiàn):
樣本 | 稀釋 | 試劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:401 | 5μL樣品 + 2 mL 稀釋緩沖液 |
腦脊液 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:4 | 50μL樣品 + 150μL 稀釋緩沖液 |
Cutoff值可以通過1:101稀釋參數(shù)來校正,1:401稀釋血清Cutoff值,稀釋度乘以4。1:4稀釋的腦脊液Cutoff值，稀釋度除以25。
如果檢測樣本的OD值在1.0和0.1之外，則應(yīng)通過下列稀釋后，再檢測
血清/血漿 | 1：100 | 1：200 | 1：400 | 1：800 | 1：1600 |
腦脊液 | 1：2 | 1：4 | 1：8 | 1：16 | 1：32 |
