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恙蟲病檢測試劑（美國進口）

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廣州健侖生物科技有限公司
2015-09-07 03:32:04
廣州市
美國
1519

【簡單介紹】

恙蟲病、乙腦(日本腦炎)、鉤端螺旋體、錐蟲等病原微生物的ELISA檢測試劑。

【詳細說明】

STG-1	恙蟲IgG ELISA	Scrub Typhus IgG ELISA	ELISA	用ELISA方法檢測人體血清中恙蟲病IgG。	96份/盒
STM-1	恙蟲IgM ELISA	Scrub Typhus IgM ELISA	ELISA	用ELISA方法檢測人體血清中恙蟲病IgM。	96份/盒

1、應(yīng)用范圍

恙蟲病IgG ELISA試劑盒可用來檢測人是否感染恙蟲病東方螺旋體（OT），它是檢測血漿或血清中抗恙蟲病東方螺旋體源性重組抗原的IgG抗體的一種ELISA檢測系統(tǒng)。此實驗可輔助診斷人是否感染了恙蟲病東方螺旋體，此試劑盒不能用于篩查血液或血液成分，僅供體外診斷用。

2、前言說明

恙蟲病是一種由恙蟲病東方體引起的傳染病，恙蟲病東方體一種約細菌大小的寄生蟲，隸屬于立克次氏體科。如果被幼蟲狀態(tài)的恙螨（嚙齒目的寄生蟲）咬了，就會傳染恙蟲病。被恙螨咬后的典型表現(xiàn)是皮膚潰瘍，之后會出現(xiàn)高燒、全身斑點皮疹和淋巴結(jié)腫大。人在接觸二級營養(yǎng)體后，一般都會出現(xiàn)恙蟲病。但是這種疾病也流行于沙漠、高山和熱帶地區(qū)。恙蟲病是一種世界性的疾病，但主要存在于東南亞和西太平洋。在東南亞的一些地區(qū)，大約20%的疾病都是由恙蟲病引起的，并且是地方性的。在zui初被咬后，疾病大概會持續(xù)10至20天。如果加以治療，則高燒會在36小時內(nèi)退去，但如果不治療的話，則會出現(xiàn)并發(fā)癥乃至死亡。

3、實驗原理

恙蟲病IgG ELISA試劑盒是一種定量檢測人血清和血漿中抗OT IgG抗體的酶免試劑。包被板的微孔中包被了重組抗原混合物（如下）。在檢測的時候，血清應(yīng)當(dāng)用Inbios的樣品稀釋液稀釋后再加入微孔中，具體請見如下的“血清應(yīng)用范例”。在溫育并洗板后，在微孔中加入HRP標(biāo)記的IgG酶聯(lián)物。溫育并洗板，再向微孔中加入TMB底物液并溫育。后再加入酸性終止液，并在450nm檢測底物反應(yīng)的程度。所檢測到的OD值與樣品中IgG抗體的濃度成正比。陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測試劑盒成分的完整性。如果樣品與抗原間發(fā)生了反應(yīng)，則樣品應(yīng)當(dāng)被認為是陽性的。

4、試劑盒成分

恙蟲病IgG ELISA試劑盒提供了足夠做96人份所需要的試劑。試劑盒成分如下：

恙蟲病檢測特定材料：

1）恙蟲病檢測抗原包被的包被板：帶板蓋的板架，恙蟲病東方體（OT）源性重組抗原包被的96孔包被板。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

2）樣品稀釋液：1瓶，15ml，用于樣品稀釋?？赡軙霈F(xiàn)沉淀，使用前輕輕混合。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

3）HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物：1瓶，6ml，內(nèi)含即用型的HRP標(biāo)記的抗人IgG溶液。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

4）TMB底物液：1瓶，9ml液態(tài)底物液，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲存于避光試劑瓶中。

5）終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

6）10倍濃縮的洗滌液，1瓶，120ml，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

7）EnWash：1瓶，20ml EnWash溶液，在加酶聯(lián)物后的洗板步驟間使用。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

8）陰性質(zhì)控：1支，30ul熱滅活陰性血清，陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性，儲存于-70℃的環(huán)境下。

9）陽性質(zhì)控：1支，30ul熱滅活陽性血清，陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性，儲存于-70℃的環(huán)境下。

注意：實驗開始前，所有的試劑和質(zhì)控都必須平衡至室溫，反復(fù)倒置使溶液混合均勻。

5、實驗所需器材但試劑盒不提供

1）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

2）生物學(xué)或高純度水

3）37℃無二氧化碳的濕度孵育箱

4）洗板機

5）1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。

6）計時器

6、樣品的采集與準(zhǔn)備

1）此實驗必須用血清來做。全血和血漿樣本不能直接檢測。

2）為了避免溶血，應(yīng)當(dāng)從凝固的紅細胞中盡快分離出血清。

3）樣品采集后應(yīng)當(dāng)盡快檢測掉，不要讓血清在室溫下停留過長時間。

4）實驗要使用血清，采血時注意靜脈采血的常規(guī)注意事項。樣品可在2-8℃下存放7天，凍存于-20℃或更低溫度時可存放30天。為了延長血清的有效期，我們可以將其凍存于-70℃的環(huán)境下。避免反復(fù)凍融樣品。

5）不要使用溶血的或脂血樣品。

6）實驗開始前，將凍存的樣品融解至室溫，并旋渦或倒置混合樣品。

7）如果血清需運輸，必需密封于容器，貼上聯(lián)合管制的標(biāo)簽作為傳染性物質(zhì)運輸。

7、實驗步驟

使用前，將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實驗前反復(fù)倒置以便試劑和樣品混合均勻。

試劑準(zhǔn)備：

1）即用型洗滌液的配置：用生物學(xué)或高純度水將10倍濃縮型的洗滌液稀釋成即用型的洗滌液。為了制備即用型的洗滌緩沖液，我們可以將120ml 10倍濃縮的洗滌液加入到1080ml蒸餾水或去離子水中，沖洗掉所有晶體，旋渦混合溶液以至所有晶體都溶解掉。制備好的洗滌液可在室溫下穩(wěn)定儲存4個月。注意：如果洗滌液里有微生物生長，則應(yīng)當(dāng)棄取。

2）包被板的準(zhǔn)備：將實驗所需數(shù)目的板條置于板架上。將剩余的板條立即裝入包裝待中，并儲存于2-8℃的環(huán)境下，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
注意：長期儲存的血清樣品不能反復(fù)凍融，血清可以儲存于-70℃的環(huán)境下。

操作步驟：

將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實驗前反復(fù)倒置以便試劑和樣品混合均勻。陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控和未知血清都必須做雙份檢測。

1）確定好所需檢驗的血清樣品量。

2）按照如下的“血清應(yīng)用范例”組織血清樣品（僅供參考，用戶也可以自己設(shè)置相應(yīng)的位置），用戶可以雜試管或ELISA塑料板內(nèi)稀釋樣品。

3）用樣品稀釋液將樣品稀釋50倍（您可以在8ul的血清中加入392ul樣品稀釋液），混合。注意：血清和質(zhì)控品不能低于4ul。

4）用移液器將稀釋好的血清和質(zhì)控各50ul加入到相應(yīng)的微孔中。

5）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。

注意：這樣是為了保證溫度的分布在每個孔的底部和血緣相等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。

6）37℃下保濕溫育板條30分鐘，在溫育器的底部放置水浴箱可達濕潤的作用。注意：不要將微孔板疊放，必須單獨地分層平輔。這對于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤的物質(zhì)，如濕紙巾等。

7）溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

8）在每一微孔中加入50ul即用型的酶聯(lián)物。

9）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）

10） 37℃下保濕溫育板條30分鐘。（同步驟6）

11）溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

12）用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。

13）室溫溫育5分鐘。

14）溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

15）用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。

16）室溫避光溫育10min。

17）溫育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液，室溫溫育1min。

18）溫育后，450nm處測 OD值。

8、臨界值的計算和結(jié)果說明

臨界值的計算：將沒有受感染的正常人血清的平均OD值+3SD來確定臨界值。例如：臨界值=平均OD值+3SD。下面臨界值是用印度人的正常血清檢測得到的，臨界值：0.370

注意：上述臨界值并不是用很多人群檢測得到的，所以，我們建議用戶能建立自己地域內(nèi)的臨界值。

結(jié)果說明：

1） OD值高于臨界值的樣品被認為是有活性（陽性）的樣品，低于臨界值的樣品被認為是無活性（陰性）的樣品。

2）有活性的（陽性）樣品必須重復(fù)檢測來確定結(jié)果是否正確，靠近臨界值的數(shù)值被認為是可疑樣品，此類樣品也必須重復(fù)檢測（做三份或更多份）。

總結(jié)：

實驗必須滿足如下表格中的要求：以下標(biāo)準(zhǔn)不能*說明試劑可能已退化或操作出現(xiàn)了錯誤，并且實驗必須重做。

因素	可接受范圍
陰性質(zhì)控的OD值（NC）	＜0.500
陽性質(zhì)控的OD值（PC）	＞0.800
Discrimination Capacity（R_P/N）	≥8.00

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。

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