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淋巴細(xì)胞分離液分離原理和使用

閱讀：5687 發(fā)布時(shí)間：2021-9-10

淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異，借助離心產(chǎn)生的重力加速度，進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。

分離原理：外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同，淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。

淋巴細(xì)胞分離液的使用方法：

1、準(zhǔn)備無菌的15ml離心管或錐形管；

2、加入淋巴細(xì)胞分離液3ml；（注意：淋巴細(xì)胞分離液使用前需恢復(fù)室溫，18-25℃）

3、Hank~s液或PBS緩沖液1:1比列（如果全血樣本粘稠，可適當(dāng)增大比例）稀釋抗凝過的全血樣品。

4、小心沿著壁管，接近分離液層面，非常緩慢地加入新鮮的稀釋過的全血樣品在淋巴細(xì)胞分離液上面；（切記不要攪渾淋巴細(xì)胞分離液）

5、小心放進(jìn)離心機(jī)（水平轉(zhuǎn)子），4℃離心20-30分鐘，速度為400g-1000g；（注意：離心機(jī)剎車應(yīng)取消，需等待自然停止）

6、小心取出離管，切記不要震動；

7、可見上層為淡紅色透明血漿，其次為薄薄的只密白色環(huán)，白色環(huán)衛(wèi)單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞。

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