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ELISA實驗中常見問題及原因分析
閱讀：4187 發(fā)布時間：2016-9-7上海恒遠銷售部、技術(shù)部根據(jù)客戶的咨詢，將的常見問題以及原因分析整理出來以供大家參考：
（一）ELSIA實驗中結(jié)果顏色淺、靈敏度偏低的原因
- 試劑盒在運輸、保存期間放置的溫度過高，時間過長，造成抗原、抗體效價下降，酶的活力降低。
- 試劑盒已經(jīng)超出保存的有效期，抗原抗體效價下降，酶的活性降低。
- 移液取樣不足，移液時抽吸、排放太快，移液嘴內(nèi)壁掛液太多或者內(nèi)壁不清潔。造成加樣量不足。
- 孵育溫度偏低，或多塊反應板重疊放置造成孔內(nèi)的實際溫度偏低，使抗原、抗體復合物形成過少。
- 保溫時間不足，抗原、抗體反應不*。
- 顯色劑加入量不足。
- 顯色液A,B比例不對。
- 洗滌時沖擊力過大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數(shù)增加，導致已經(jīng)形成的抗原、抗體復合物洗脫。
- 底物反應的溫度不夠、時間不足。
（二）ELSIA實驗中結(jié)果出現(xiàn)白板、陽性對照不顯示的原因
- 洗滌液配制有誤。
- 終止液誤作為濃縮洗滌液或者酶結(jié)合物稀釋使用。
- 漏加酶結(jié)合物，誤加酶結(jié)合物或者酶標二抗的實驗順序錯誤。
- 終止液當作緩沖溶液使用。
- 配制溶液中殘留了滅活酶活力的物質(zhì)。
- 底物液未加入OPD或者TMB.
- 運輸、存儲不當、導致酶活力喪失。
- 底物液中未加入過氧化氫或放置過久過氧化氫失效。
（三）ELSIA實驗中結(jié)果全部顯色的原因
- 酶結(jié)合物的濃度過大。
- 孵育溫度偏高，底物顯色時間過長。
- 洗滌不充分，樣品有其他成分殘留或者酶結(jié)合物殘留。
- 底物配制時間過久，底物受光照射時間較長或污染。
- 整批樣品放置時間過長被污染或生長細菌。
- 移液嘴重復使用時，未清洗干凈或者消毒不*。
- 配制溶液的水質(zhì)有問題。
（四）ELSIA實驗中結(jié)果陰性、陽性對照顯色差距較小的原因
- 稀釋不準、加樣量不準。
- 加樣時各孔均被污染。
- 底物不新鮮，配制時間過長或被污染。
- 試劑效價下降或超過了試劑的有效使用期。
- 配制溶液的水質(zhì)有問題。
（五）ELSIA實驗結(jié)果重復性不好的原因
- 樣品加入量多少不一，加樣時間又長有短。
- 樣品加入后未充分混合均勻。
- 移液加樣器加樣量不一致。
- 酶標儀濾光片不對。
- 操作過程中個別反應孔中液體外濺。
- 不同批號試劑混用。
- 瓶蓋交叉使用。
- 孵育條件和保溫時間不一致。
- 顯色時間和條件不一致
- 邊緣效益，導致周邊孔（尤其是四個角）較中央孔顯色深。
- 將酶結(jié)合物或底物溶液加在孔壁上，并有殘留。
- 酶結(jié)合物未充分混勻就加入反應孔中。
- 洗滌條件不一致。
- 多加或少加了酶標記物、底物。