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今日要點(diǎn):制備培養(yǎng)基的具體操作步驟
閱讀：3463 發(fā)布時(shí)間：2018-3-15在微生物檢驗(yàn)中，正確制備培養(yǎng)基是基礎(chǔ)步驟之一。在以往的銷售過程中，科研朋友對(duì)制備培養(yǎng)基的操作步驟提出了很多的問題。實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，并記錄相關(guān)信息，恒遠(yuǎn)技術(shù)為此做出了總結(jié)，在這里分享給大家：
一、水
實(shí)驗(yàn)用水的電導(dǎo)率在25℃時(shí)不應(yīng)超過25μS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4ΜΩcm)，除非另有規(guī)定要求。
水的微生物污染不應(yīng)超過103 CFU/mL。應(yīng)按GB 4789.2，采用平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h進(jìn)行定期檢查微生物污染。
二、稱重和溶解
小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基(必要時(shí)佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末)，先加入適量的水，充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)，然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散，必要時(shí)應(yīng)*溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。
三、pH的測定和調(diào)整
用pH計(jì)測pH，必要時(shí)在滅菌前進(jìn)行調(diào)整，除特殊說明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時(shí)，pH應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)pH±0.2范圍內(nèi)。一般使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH。如需滅菌后進(jìn)行調(diào)整，則使用滅菌或除菌的溶液。
四、分裝
將配好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦?，容器的體積應(yīng)比培養(yǎng)基體積zui少大20%。
五、滅菌
1.一般要求
培養(yǎng)基應(yīng)采用濕熱滅菌法或過濾除菌法。
某些培養(yǎng)基不能或不需要高壓滅菌，可采用煮沸滅菌，如SC肉湯等特定的培養(yǎng)基中含有對(duì)光和熱敏感的物質(zhì)，煮沸后應(yīng)迅速冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接使用。
2.濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行，高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min，具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過1000 mL，否則滅菌時(shí)可能會(huì)造成過度加熱。所有的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或使用說明的規(guī)定進(jìn)行。
滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s，以防加熱過度。這對(duì)于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要，例如含有煌綠的培養(yǎng)基。
3.過濾除菌
過濾除菌可在真空或加壓的條件下進(jìn)行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的。
各個(gè)部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)，為了達(dá)到有效過濾，應(yīng)事先將濾膜用無菌水潤濕。
4.檢查
應(yīng)對(duì)經(jīng)濕熱滅菌或過濾除菌的培養(yǎng)基進(jìn)行檢查，尤其要對(duì)pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標(biāo)進(jìn)行檢查。
六、添加成分的制備
制備含有有毒物質(zhì)的添加成分(尤其是抗生素)時(shí)應(yīng)小心操作(必要時(shí)在通風(fēng)柜中操作)，避免因粉塵的擴(kuò)散造成實(shí)驗(yàn)人員過敏或發(fā)生其他不良反應(yīng)；制備溶液時(shí)應(yīng)按產(chǎn)品使用說明操作。
不要使用過期的添加劑；抗生素工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配；批量配制的抗生素溶液可分裝后冷凍貯存，但解凍后的貯存溶液不能再次冷凍；廠商應(yīng)提供冷凍對(duì)抗生素活性影響的有關(guān)資料，也可由使用者自行測定。
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