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            技術(shù)文章

            如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中所需要的二抗

            閱讀:2899          發(fā)布時(shí)間:2015-7-1

            免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。既然是抗體與抗原的反應(yīng),抗體就在實(shí)驗(yàn)中顯得特別重要,如何選擇抗體就顯得很重要,今天上海恒遠(yuǎn)與您一起分享一下如何選擇正確的二抗,進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)。
            1 種屬來源要匹配:根據(jù)所用一抗選定二抗。一般來說,如果一抗是小鼠源性,二抗應(yīng)選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前,美國Vector公司和 Zymed公司都有開發(fā)的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒,即一抗來源于小鼠,該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內(nèi)源性小鼠Ig的封閉液,可以 得到清晰的染色背景。

            2.注意抗體同種型和亞型:確定一抗同種型和亞型后,可以選擇抗一抗來源種屬廣譜Ig或針對一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠IgG1,可以選用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。

            3.正確使用:也需要重新選擇稀釋比例。一般上海恒遠(yuǎn)會(huì)提供稀釋比例從1:10稀釋度始,作5倍比稀釋。
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