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2015酶聯(lián)免疫試劑盒檢測方法的解說
閱讀：840 發(fā)布時間：2014-12-19 時光匆匆而過，還記得去年的試劑盒分析會議中，我公司夏說要在2014年中提升試劑盒的技術(shù)資料內(nèi)容，多多分享，供給客戶們參考。轉(zhuǎn)眼過，本年度就要過去了，上海恒遠(yuǎn)技術(shù)部根據(jù)產(chǎn)品的原理與特性，分析解說2015酶聯(lián)免疫試劑盒檢測方法：
首先我們要從抗體的酶標(biāo)記及質(zhì)量鑒定、抗原濃度的優(yōu)化、洗滌液及保護液的優(yōu)化、酶標(biāo)抗體稀釋度的優(yōu)化、底物液的優(yōu)化、底物作用時間的優(yōu)化，然后比較結(jié)果。
1. 抗體的酶標(biāo)記及質(zhì)量鑒定
試劑盒收集*峰即為酶標(biāo)抗體峰。標(biāo)記完后用紫外分光光度計在分別在280nm、及403nm處測定酶標(biāo)記物的A值，計算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結(jié)合率以及標(biāo)記率。
2. 包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優(yōu)化
① 包被緩沖液的優(yōu)化：三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標(biāo)抗體工作濃度為1：400及1：300，用自動酶標(biāo)儀分析，選擇*的包被緩沖液系統(tǒng)。
② zui適抗原包被濃度的優(yōu)化：顯色的強度在一定范圍內(nèi)與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
3. 封閉液、洗滌液及保護液的優(yōu)化
① 封閉液的優(yōu)化：采用文獻(xiàn)報道的方法進行封閉，其封閉液的組成為：10mM磷酸鹽緩沖液含1%的牛血清白蛋白。
② 洗滌液的配制：采用文獻(xiàn)報道的方法配制洗滌液。
4. 酶標(biāo)板保護液的優(yōu)化
在封閉完后加入保護液于4℃冰箱中孵育放置一個晚上，同時與未做保護的酶標(biāo)板進行對照，然后將保護的及未保護的酶標(biāo)板置于37烘箱中放置15天，考察保護液對酶標(biāo)板的穩(wěn)定性的影響。
5. 酶標(biāo)抗體稀釋度、保護液的優(yōu)化
① 稀釋度的優(yōu)化：抗原包被濃度為4ug/ml，經(jīng)孵育、洗滌后、顯色終止后，用自動酶標(biāo)儀分析，選擇A值為1.5左右的酶標(biāo)抗體稀釋度為zui適工作濃度。
② 保護液的優(yōu)化：適當(dāng)?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標(biāo)抗體的活性起一定的保護作用，因此我們設(shè)計了一組保護劑用于保護酶標(biāo)抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標(biāo)抗體做對照，
以上就是酶聯(lián)免疫試劑盒檢測方法的分析，希望能夠給您的實驗中帶來實際幫助。非常感謝您長期以來對我公司的信賴與支持，為適應(yīng)市場的需要和發(fā)展，我公司將于2015元旦對酶聯(lián)免疫試劑盒包裝進行升級，新包裝更加環(huán)保和精美。