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            技術(shù)文章

            人抗類固醇生成細(xì)胞抗體(SCA)ELISA試劑盒產(chǎn)品說明書

            閱讀:768          發(fā)布時(shí)間:2022-8-25

            使用目的:

            本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗類固醇生成細(xì)胞抗體(SCA)表達(dá)。

            實(shí)驗(yàn)原理

            本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本抗類固醇生成細(xì)胞抗體(SCA)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗可與樣品中抗類固醇生成細(xì)胞抗體(SCA)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中抗類固醇生成細(xì)胞抗體(SCA)的存在與否。

            試劑盒組成

            1

            30倍濃縮洗滌液

            20ml×1

            7

            終止液

            6ml×1

            2

            酶標(biāo)試劑

            6ml×1

            8

            陽性對照

            0.5ml×1

            3

            標(biāo)包被

            12孔×8

            9

            陰性對照

            0.5ml×1

            4

            樣品稀釋液

            6ml×1

            10

            說明書

            1

            5

            顯色劑A

            6ml×1

            11

            封板膜

            2張  

            6

            顯色劑B

            6ml×1/

            12

            密封袋

            1個(gè)

            標(biāo)本要求 

            1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

            1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

            2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

            4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同3

            8. 洗滌:操作同5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

            10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


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