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國慶特獻免疫組化實驗一抗稀釋注意事項
閱讀：3498 發(fā)布時間：2015-9-30 如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進行實驗。但是由于標本類型、實驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗，從中發(fā)現(xiàn)zui合適的稀釋比例。
如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Useatanassaydependentdilution"，就需要做大量的預實驗來摸索zui合適的比例了。未純化的抗體一般在說明書中不會標明抗體的濃度，因為大部分全抗血清、培養(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標明其中特異性抗體的濃度，實驗者可以參考下表中“估計濃度"確定各種實驗稀釋比例。
一般來說，抗體說明書都會提供一個稀釋度范圍，但是，有些公司生產(chǎn)的抗體，其說明書上沒有提供抗體稀釋度。這是可以理解的，因為如果說明書上標明的抗體稀釋度如果高的話，就說明這種抗體效價不高，質(zhì)量不好。為此，實驗者可以先在網(wǎng)上搜索一些相關(guān)的文獻，文獻的方法與材料中一般會把抗體來源以及稀釋度都詳細的標出的。但真正做實驗時，還是要根據(jù)自己實驗樣品的情況和檢測指標表達的豐富程度等因素先摸索一下抗體的稀釋度的。
所以在做預實驗時，就采用倍比稀釋法，先做一個梯度，比如1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600. 看看在這幾個梯度范圍內(nèi)，樣品中的目的蛋白的表達情況，然后再從中確定你認為的稀釋度進行正式實驗，這樣做比較好一些。由于標本類型、實驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。
一抗稀釋液一般為PBS/0.4% Triton X-100/1%BSA。