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李工年末分享細(xì)胞因子溶解方法
閱讀：1185 發(fā)布時間：2014-12-4 李工年末分享細(xì)胞因子溶解方法
我們知道，PeproTech的所有細(xì)胞因子和蛋白均為凍干粉，這使得運輸非常便捷，只要常溫即可。而且，細(xì)胞因子和蛋白凍干粉非常穩(wěn)定，在-20oC或-80oC條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解，然后以液體形式加到培養(yǎng)體系或注射入動物體內(nèi)。溶解步驟非常關(guān)鍵，因溶解不好會導(dǎo)致細(xì)胞因子或蛋白的失活，這也是很多用戶在實際使用中經(jīng)常遇到的問題。
技術(shù)部李工分享： PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進(jìn)行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象）。
1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2．溶解（Reconstitution）：PeproTech細(xì)胞因子用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇）溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產(chǎn)品，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間，待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇：
1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品，請依照PeproTech細(xì)胞因子說明書上的濃度，同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
經(jīng)常有用戶會問，為什么會有這么多種溶解方法？
答：我們知道，蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強度。PeproTech的細(xì)胞因子或重組蛋白在出廠前均經(jīng)嚴(yán)格測試，說明上所標(biāo)明的溶解液是能夠?qū)⒃摷?xì)胞因子或重組蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標(biāo)明的不符，很多時候會造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無法溶解，這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。