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            迪圖(上海)生物科技有限公司
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            天隆

            普通PCR引物與qPCR引物的對比

            時間:2023/6/30閱讀:1227
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            普通PCR和熒光定量PCR的檢測方式具有較大的差別。熒光定量PCR實時監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光,普通PCR通過檢測插入DNA中核酸染料的量來測定PCR最終產(chǎn)物量。熒光定量PCR可以通過擴增曲線進行精確定量,普通PCR則是通過電泳的方式進行定性分析。那么在普通PCR和熒光定量PCR的引物設(shè)計方面,有什么相同點和不同點呢?今天小編就給大家匯總一下。

            相同處:

            ?  序列的查找是一致的。

            ?  序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段。

            ?  選取合適的擴增片段大小。

            ?  避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續(xù)配對。

            ?  避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu)。

            ? Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%。

            ?  引物之間的Tm相差避免超過2℃。

            ?  引物的3’端避免出現(xiàn)3個或3個以上連續(xù)相同的堿基。

            不同處:

            熒光定量PCR 引物

            ?  PCR產(chǎn)物長度:要求在300bp以內(nèi),一般80-150bp之間。

            ?  引物特異性:對引物要求高,盡量減少引物二聚體的產(chǎn)生,熔解曲線要求單一產(chǎn)物。

            ?  擴增效率:熒光定量 PCR的目的是進行定量或者相對定量,擴增效率應(yīng)在90%—110%之間。

            ?  多對目的基因同時擴增,文獻上查來的引物條件會不同,需要設(shè)計盡可能條件一致的引物。

            ?  目的基因含量比較低時,需要設(shè)計靈敏度比較高的引物。
             

            普通PCR 引物

            ?  普通PCR的擴增長度,根據(jù)實驗的要求不同,一般是從150bp到幾千bp不等。

            ?  相對于熒光定量PCR,普通PCR對二級結(jié)構(gòu)要求較低。

            ?  對擴增效率要求不高。

            ?  可以選用梯度PCR儀,選擇不同退火溫度,對引物退火溫度要求不需要一致。


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