會(huì)員.png)
8
當(dāng)前位置：默克生命科學(xué)-默克化工技術(shù)（上海）有限公司>>技術(shù)文章>>說(shuō)說(shuō)高質(zhì)量培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)操作步驟
說(shuō)說(shuō)高質(zhì)量培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)操作步驟
高質(zhì)量培養(yǎng)基是用于人類多能干細(xì)胞的培養(yǎng)基，它沒有外來(lái)動(dòng)物成分，化學(xué)成分清晰，并且適合無(wú)滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)。該產(chǎn)品適用于系統(tǒng)中培養(yǎng)的干細(xì)胞，可用于干細(xì)胞傳代。它含有防止細(xì)胞凋亡和分化的干細(xì)胞保護(hù)因子，并對(duì)細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用。
1、不需要滋養(yǎng)細(xì)胞。
2、成分清晰，批次之間的差異很小。
3、適用于在Essential8系統(tǒng)中培養(yǎng)的人多能干細(xì)胞。
4、不含外來(lái)動(dòng)物成分，大大降低了各種病毒，霉菌和支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
高質(zhì)量培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、基質(zhì)膠包被的培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板，并加入1mL/0.5mL即用型基質(zhì)膠（AC-1001007）移至每個(gè)孔，輕輕搖動(dòng)6孔板/12孔板，使Matrigel*覆蓋培養(yǎng)皿的底部。將其置于37℃的恒溫箱中，保溫1h?2h。實(shí)驗(yàn)前將其取出，并放在干凈的工作臺(tái)/生物安全柜中以在室溫下平衡。20分鐘如果暫時(shí)不使用，可以用Parafilm密封并在2-8°C下保存并在1周內(nèi)使用。
注意：①冷凍的干細(xì)胞數(shù)量約為1×106細(xì)胞/mL，相當(dāng)于6孔板中的1個(gè)孔；②即用型基質(zhì)膠對(duì)溫度敏感，因此請(qǐng)?jiān)谑褂煤罅⒓茨米?，并在使用后立即放回原處。?chǔ)存在4°C的冰箱中，不要接觸Matrigel液面的瓶體直接接觸，將影響基質(zhì)膠的質(zhì)量。
2、首先將2?3mL干細(xì)胞培養(yǎng)基添加到15mL離心管中，以備后用。
3、解凍：將從液氮中取出的冷凍保存管快速浸入37℃的溫水中，并迅速搖動(dòng)使其在1?2min內(nèi)解凍；注意：應(yīng)迅速?gòu)囊旱腥〕鲭姵?，以盡量減少其暴露于室溫的時(shí)間。
4、離心：將凍存管中的凍存溶液解凍后，滴加到裝有干細(xì)胞培養(yǎng)基的15mL離心管中。將15mL離心管放入低速離心機(jī)中，然后以1200rpm離心。3分鐘；
5、重懸：離心后，棄去上清液，加入1mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基移液，吸干細(xì)胞沉淀約3至5次。
6、接種：均勻吹吸后，丟棄已平衡的即用型基質(zhì)膠，將均勻吹干的干細(xì)胞懸液加入包被的6孔板中，并在每個(gè)孔中填充2mL訓(xùn)練系統(tǒng)。
7、高質(zhì)量培養(yǎng)基培養(yǎng)：可將接種的6孔板置于倒置相差顯微鏡下，觀察接種的干細(xì)胞的密度和細(xì)胞團(tuán)的大小。超過(guò)4個(gè)細(xì)胞的團(tuán)塊更合格。水平的十字架很輕。搖動(dòng)6孔板/12孔板以均勻分布細(xì)胞。在37°C和5％CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育。第二天觀察細(xì)胞的粘附；
8、更換培養(yǎng)基：從復(fù)蘇開始每隔24小時(shí)更換一次培養(yǎng)基。