核酸蛋白 全能檢測(cè)
如果你還不知道熒光定量PCR儀可以用來做蛋白檢測(cè)和分析,
那你就是“奧特曼”啦!
如果你正好在開展蛋白尤其是膜蛋白相關(guān)的科研工作,
那么恭喜你,
你又可以多一個(gè)好使的研究工具啦!
它就是新一代全光譜熒光定量PCR儀
qTOWERiris系列
全光譜檢測(cè),拓展蛋白應(yīng)用
qTOWERiris突破性地將檢測(cè)光譜范圍拓寬到了波長更短的紫外光區(qū)域,覆蓋從近紫外UVA到近紅外NIR的全光譜范圍,波長從360nm到730nm。這一革新性的變化,大大擴(kuò)展了熒光定量PCR儀的應(yīng)用場(chǎng)景。
1、 近紫外光區(qū)域的核酸檢測(cè)應(yīng)用,為做核酸多重檢測(cè)的用戶提供了更多的選擇,比如可以檢測(cè)ATTO390、ATTO425核酸標(biāo)記熒光染料的信號(hào);
2、 蛋白檢測(cè)方面的應(yīng)用,比如說可以利用蛋白熔解曲線分析功能,開展CPM、ANS等熒光染料標(biāo)記的蛋白熱穩(wěn)定性檢測(cè)、蛋白與配體互作研究、蛋白結(jié)晶和儲(chǔ)存體系優(yōu)化等;
在蛋白相關(guān)研究中,膜蛋白以其強(qiáng)大的功能性和生物學(xué)活性,成為非常重要的研究靶點(diǎn),如細(xì)胞的增殖和分化、能量轉(zhuǎn)換、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)龋寂c膜蛋白息息相關(guān),而且估計(jì)有60%左右的藥物作用都與膜蛋白有關(guān)。
由于在膜蛋白樣品制備過程中,需要用到一定濃度的表面活性劑,來使脂膜解體釋放膜蛋白并維持去膜狀態(tài)下膜蛋白結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性,因此膜蛋白樣品溶液中往往含有較多的表面活性劑。如果用普通的熒光染料如SYPRO Orange去標(biāo)記膜蛋白,因其溶解性不好、背景噪音高而達(dá)不到好的檢測(cè)效果,此時(shí)如果換成CPM熒光染料(C24H22N2O4)就能很好地實(shí)現(xiàn)膜蛋白熔解曲線檢測(cè)和分析。
CPM的激發(fā)光Ex為384nm,檢測(cè)光Em為470nm,在近紫外區(qū)域,那么問題來了,普通的熒光定量PCR儀,激發(fā)光譜往往從450nm左右的藍(lán)光區(qū)域開始,沒有辦法實(shí)現(xiàn)CPM的檢測(cè)。而耶拿公司的qTOWERiris的紫外通道,檢測(cè)光譜正好匹配CPM染料,很好地滿足了CPM標(biāo)記的膜蛋白的高靈敏度檢測(cè)。
除了CPM熒光染料,ANS(8-苯胺基-1-萘磺酸)也是一種常用的蛋白標(biāo)記熒光染料,和蛋白的結(jié)合性好,本底低。ANS的激發(fā)光Ex為380nm,檢測(cè)光Em為470nm,也正是位于qTOWERiris紫外通道的檢測(cè)范圍。因此,qTOWERiris能為開展蛋白研究的用戶提供非常方便的熔解曲線分析,進(jìn)而快速獲得蛋白熱穩(wěn)定性、蛋白和小分子互作、蛋白結(jié)晶條件優(yōu)化等方面的信息。
典型的蛋白熔解曲線結(jié)果:
圖1. 蛋白熔解曲線原始信號(hào)圖
圖2. 蛋白熔解曲線峰值圖
?qTOWERiris還能為您帶來可靠的檢測(cè)結(jié)果和人性化的使用體驗(yàn)。
溫控精準(zhǔn),重復(fù)性好
延續(xù)了耶拿PCR儀經(jīng)典的鍍金純銀樣品槽和快準(zhǔn)穩(wěn)的高速PCR技術(shù),最大升溫速率可達(dá)8℃/s,溫度準(zhǔn)確性±0.1℃,精準(zhǔn)的溫控是實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確熔解曲線分析的重要前提,再結(jié)合先進(jìn)的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng),不存在樣品間的邊緣效應(yīng),提供更好的檢測(cè)重復(fù)性。
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