炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法)

【產(chǎn)品名稱】

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

通用名稱：炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法)

Name

：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

4  擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量  PCR  儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇：  檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None  即可。

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

炭疽是由炭疽桿菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一種人獸共患病。BA

在環(huán)境中形成芽孢，可長期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA  的穩(wěn)定性及其致

病性，易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA  檢測(cè)方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色

鏡檢、血清學(xué)檢測(cè)等，但這些方法均不適合早期的快速偵檢?；诤怂釞z測(cè)的熒光-PCR

技術(shù)，因其靈敏度高、操作簡單、特異性好，可快速檢測(cè)炭疽病原，及時(shí)控制炭疽疫

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

95℃

94℃

55℃

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

10min

15sec

30sec

否

否

是

情

[1]

。

2

40 cycles

本試劑盒適用于檢測(cè)皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌，用于

炭疽桿菌感染的輔助診斷。

5  結(jié)果分析判定

6.1結(jié)果分析條件設(shè)定

【檢驗(yàn)原理】

[2-3]

，用熒光 PCR  技術(shù)對(duì)炭疽

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)

整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15  范圍內(nèi)調(diào)

節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)

閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

本試劑對(duì)炭疽桿菌特異性基因設(shè)計(jì)引物和熒光探針

桿菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名

稱

格

7結(jié)果判斷

核酸提取液

酶液

1.5mL×2  管

50μL×1 管

1.0mL×1 管

50μL×1 管

250μL×1 管

陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，丏曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，丏出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試

驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0  和明顯擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無 Ct  值丏無明顯的擴(kuò)增曲線。

BA  反應(yīng)液

BA  陽性質(zhì)控品

陰性質(zhì)控品

8 檢測(cè)方法的局限性

注：

1）不同批號(hào)試劑不能混用。

Ø  樣本檢測(cè)結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

Ø  樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

Ø  陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

Ø  病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

Ø  不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

Ø  試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定

量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融數(shù)不超過 5 次，有效期 12  個(gè)月。

【適用儀器】

ABI  、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf  等系列

熒光定量 PCR  檢測(cè)儀。

Ø  本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

9.  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

【標(biāo)本采集】

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct  值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，丏 Ct  值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

皮膚炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子標(biāo)本，放入標(biāo)本采集管中；腸炭

疽，取糞便  1g

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6  個(gè)月，標(biāo)本

運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【注意事項(xiàng)】

Ø  所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，*混勻并短暫離心；

Ø  反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

【使用方法】

1.  樣品處理（樣本處理區(qū)）

Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

Ø  使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服；

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

Ø 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

Ø  試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通

則》進(jìn)行處理。

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