今天小編給大家講講影響等溫滴定量熱儀基線(xiàn)位置的因素有哪些?
等溫滴定量熱法是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的研究生物熱力學(xué)和生物動(dòng)力學(xué)的重要方法。它通過(guò)高靈敏度自動(dòng)微量熱計(jì)連續(xù)、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)和記錄變化過(guò)程的量熱曲線(xiàn)，同時(shí)提供原位、在線(xiàn)和無(wú)損的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)信息
1、在使用過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)基線(xiàn)位置變化的問(wèn)題。這里列出了影響基線(xiàn)位置的一些主要因素1.1安裝ITC儀表時(shí)，避免安裝在陽(yáng)光直射的位置，以免造成長(zhǎng)期陽(yáng)光直射，這將導(dǎo)致溫度沿著滴定儀傳輸?shù)綐悠烦兀?dǎo)致基線(xiàn)漂移
2、不要長(zhǎng)時(shí)間將空調(diào)直接吹到ITC的安裝位置，當(dāng)空調(diào)安裝在基線(xiàn)
3、處時(shí)，避免因不小心的手動(dòng)操作而導(dǎo)致樣品漂移，例如滴定針意外彎曲(滴定針?lè)胖迷陟o止位置時(shí)經(jīng)常發(fā)生，但許多情況不容易發(fā)現(xiàn))，在滴定過(guò)程中，彎曲的滴定針可能會(huì)繼續(xù)摩擦樣品池的側(cè)壁，導(dǎo)致樣品池的溫升
4、安裝不到位或固定螺栓松動(dòng)。更換滴定針后，滴定針可能安裝不到位(移液管底部的玻璃針管太長(zhǎng))，或長(zhǎng)期使用后固定滴定針的螺栓可能松動(dòng)，導(dǎo)致滴定針下沉，在滴定過(guò)程中，由于樣品池底部的滴定針長(zhǎng)時(shí)間摩擦，可能導(dǎo)致樣品池的溫度升高
5、混合速率的影響。不同的攪拌速度將導(dǎo)致不同的熱釋放(攪拌速度越高，溫度越高，基線(xiàn)越低，反之亦然)。通常，在ITC實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)O(shè)置了一個(gè)恒定的攪拌速度，這通常不會(huì)因?yàn)閿嚢杷俣鹊淖兓淖兓€(xiàn)。然而，當(dāng)由于某些移液管故障或高樣本粘度導(dǎo)致攪拌器旋轉(zhuǎn)不均勻時(shí)，樣本池的熱量可能會(huì)發(fā)生變化
6、樣本池中存在氣泡。這種現(xiàn)象可能是影響初始基線(xiàn)位置的最常見(jiàn)原因。樣本溫度和樣本添加技能可能會(huì)影響基線(xiàn)。當(dāng)樣品池中因溫度差(因?yàn)樗谋葻崛荽笥诳諝獾谋葻崛?，且氣泡占?jù)水分子的位置，導(dǎo)致樣品池中的總比熱容降低)而增加樣品或脫氣而產(chǎn)生小氣泡時(shí)，當(dāng)向樣品池施加與參考池相同的功率時(shí)，樣品池的溫度將略高于參考池的溫度，這使得傳感器“錯(cuò)誤地認(rèn)為”樣品池更熱，這會(huì)降低樣品池的功率，導(dǎo)致基線(xiàn)下降。憑借出色的操作技能，實(shí)際初始基線(xiàn)和設(shè)定參考功率之間的差異通常約為0.1Cal/s。當(dāng)然，通常情況下，±1 ucal/s初始基線(xiàn)位置的偏差是可以接受的。需要注意的一個(gè)問(wèn)題是，在處理含有洗滌劑的膜蛋白樣品(如Triton X100、np40等)時(shí)，建議一次小心添加樣品，不建議通過(guò)抽吸排出氣泡，這可能會(huì)使問(wèn)題更加嚴(yán)重
7、參考細(xì)胞中存在氣泡。這種現(xiàn)象與上述現(xiàn)象正好相反
8、基線(xiàn)顯示逐步下降。當(dāng)?shù)味ㄡ樦兄挥锌諝饣驑悠肺?填充時(shí)，在滴定過(guò)程中，隨著樣品的注入，樣品池的比熱容量由于在樣品池中連續(xù)注入空氣而降低，導(dǎo)致基線(xiàn)逐步下降;另一個(gè)可能的原因是連接滴定針的填充端口適配器(FPA)磨損，需要更換新的FPA;在用ITC研究酶動(dòng)力學(xué)的過(guò)程中也會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似的現(xiàn)象?？煽紤]反應(yīng)物之間是否存在可能的催化過(guò)程
9、樣品池未滿(mǎn)。當(dāng)樣品池未*填充時(shí)，隨著反應(yīng)物逐漸注入滴定器，樣品池逐漸填充，導(dǎo)致樣品池的比熱容逐漸增加，基線(xiàn)逐步升高。因此，請(qǐng)加滿(mǎn)280 UL樣品并排出氣泡。
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