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上海島韓實業(yè)有限公司
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造血祖細(xì)胞的培養(yǎng)離不開二氧化碳培養(yǎng)箱
2016-2-24 閱讀(879)
造血祖細(xì)胞的概念是1978年由美國、加溫度越高則溶解度越低。所以在室溫條件己經(jīng)拿大等門個國家的實驗血液學(xué)家提出,調(diào)節(jié)過的液體培養(yǎng)基放到37aC的培養(yǎng)箱里,繼之造血祖細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)pH值可隨溫度升高而升高,其升高的程度與也得到廣泛的應(yīng)用。目前,應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)氣相液相的比例有關(guān),經(jīng)驗值為0.Zto.4之間。已成為許多科研工作的手段和基礎(chǔ)。造血祖細(xì)胞的培養(yǎng)離不開二氧化碳培養(yǎng)箱的應(yīng)用,HH.CP-T(80升)二氧化碳培養(yǎng)箱是上海島韓實業(yè)有限公司生產(chǎn)的，其對造血祖細(xì)胞培養(yǎng)的影響有許多方面, 主要有以下幾點。
一、二氧化碳(C 0 2)濃度細(xì)胞生存、代謝、增殖、分化于培養(yǎng)體系中, 首先需要穩(wěn)定的pH環(huán)境, 目前, 造血祖細(xì)胞培養(yǎng)體系的p H 多用二氧化碳一碳酸氫鈉(C 0 2 一N aH C 0 3)緩沖液系統(tǒng)控制[2] , 如果c o Z 濃度保持恒定, 則pH 值與N aH C O 3 濃度的對數(shù)成比例,N 州C O 3 量增加10倍, 則pH 值上升1.0 ; N aH CO3 量減至1/2 ,則pH 值下降0.3。在二氧化碳培養(yǎng)箱的密閉體系中, 培養(yǎng)液中的pH 變化受下列因素影響:1 液相中的N aH CO 3 濃度; o氣相中的C O Z ;? 氣相與液相兩者容積的比例; ? 細(xì)胞數(shù)及使用細(xì)胞種類的乳酸的產(chǎn)生量。
C O : 氣體對液體的溶解度與溫度有影響,溫度越高則溶解度越低。所以在室溫條件己經(jīng)調(diào)節(jié)過的液體培養(yǎng)基放到37 ℃ 的培養(yǎng)箱里, 其pH 值可隨溫度升高而升高, 其升高的程度與氣相液相的比例有關(guān), 經(jīng)驗值為0. 2刁.4 之間。如果培養(yǎng)箱內(nèi)植入培養(yǎng)的細(xì)胞, 由于細(xì)胞呼吸產(chǎn)生c o Z , 糖分解后產(chǎn)生乳酸, 在產(chǎn)生1m ol的乳酸的同時, 乳酸作用于液相中的N aH c O 。,則發(fā)生lm ol 量的c o Z , c o : 發(fā)生后立即移行于氣相中, 此時N aH C O 3 即產(chǎn)生緩沖作用, 如果細(xì)胞數(shù)太多, 產(chǎn)生乳酸量超過N aH C O 3 的中和能力, 則液相的pH 下降。
培養(yǎng)體系中造血細(xì)胞濃度較低, 由于細(xì)胞二、濕度造血祖細(xì)胞*的生長濕度是10 % , 如果能保持c o : 培養(yǎng)箱內(nèi)的水分, 一般均能維持造血祖細(xì)胞生長所需的濕度, 如果C O : 培養(yǎng)箱內(nèi)的水分蒸發(fā)消耗掉, 造血祖細(xì)胞的生長會停止或死亡, 因此, 應(yīng)定期檢查C O Z培養(yǎng)箱內(nèi)的水分, 及時補(bǔ)充。
二、溫度*的溫度是37 ℃ , 適宜的溫度是造血祖細(xì)胞生長所必需的, 溫度過高過低會直接影響造血祖細(xì)胞的生長, 另外, 溫度也影響C O : 的在液體的溶解度, 溫度越高, 則溶解度降低, 通過pH 值的波動來影響造血祖細(xì)胞的生長。
討論
影響體外造血祖細(xì)胞生長的因素很多, 例如細(xì)胞種類、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器械、分化誘導(dǎo)因子等Izj , 就c o : 培養(yǎng)箱而言, 主要的是以上提及的3 個因素, 其中濕度和溫度較穩(wěn)定, 發(fā)生故障的機(jī)會不多, 而影響C q 濃度的因素較多, 因此, 多數(shù)c o : 培養(yǎng)箱的毛病出在此參數(shù)。的代謝產(chǎn)物不致使培養(yǎng)體系中的pH 發(fā)生巨大的變化, 用c O Z一N aH c o 3 緩沖體系足以控制其p H , 若培養(yǎng)液內(nèi)11. 6 m m o 比濃度的N 州C O 3 ,則*的C O : 濃度是5% , 可使pH 經(jīng)常保持在7. 3 左右, 一般pH 低于7. 0 則細(xì)胞的代謝活性低下。如果C O : 濃度顯示達(dá)不到5% 時, 首先檢查C O : 氣罐是否有氣體, 如果沒有, 應(yīng)馬上予以更換;其次是C O : 入口及其通道是否阻塞, 這些部位往往是較易發(fā)生故障和難于發(fā)現(xiàn)的, zui簡單的檢查和修理方法是用lo ml 的注射器來回抽吸或灌氣, 對于輕度堵塞可以解決問題。另外的原因是控制C O : 的微處理器出毛病, 出現(xiàn)這種情況時需請專業(yè)人員進(jìn)行修理。
還有一種情況也是在實際工作中經(jīng)常見到的,就是C O : 培養(yǎng)箱的C O : 濃度數(shù)字已顯示己達(dá)5% , 但培養(yǎng)基仍不能維持理想的pH 值, 究其原因可能有以下幾點: 1 c o : 培養(yǎng)箱的c o : 濃度數(shù)字與實際的c o : 濃度不符; oc o : 培養(yǎng)箱門未關(guān)閉好; C O : 培養(yǎng)箱開門次數(shù)過多, C q濃度難于達(dá)到造血祖細(xì)胞的培養(yǎng)要求。
