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本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

 

本公司專(zhuān)業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商/代理商，質(zhì)量保證，價(jià)格低，是國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及國(guó)內(nèi)各大院校長(zhǎng)期供應(yīng)商，

各種種屬 ：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊；標(biāo)本 ：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水等 ；本公司實(shí)驗(yàn)室*提供代測(cè)服務(wù)，詳細(xì)信息！：86- / 31255782

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86-

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試驗(yàn)原理：

LPL試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知LPL濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將LPL和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中LPL的濃度呈比例關(guān)系。

 

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型

塑料膜板蓋1塊半塊即用型

標(biāo)準(zhǔn)品：80U/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀

空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型

生物素標(biāo)記的抗LPL抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型

親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型

洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

 

自備材料

1．蒸餾水。

2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項(xiàng)

1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2．實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

9．按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準(zhǔn)備

1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：

80 U/L（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

40 U/L（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 U/L（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 U/L（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.0 U/L（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 U/L（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0 U/L（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

 

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。

 

操作步驟

1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案

標(biāo)準(zhǔn)品濃度（U/L）

A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

 

 

局限

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的LPL標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的LPL含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

 

3、檢測(cè)值范圍：0-80U/L

 

4、敏感度： 0.1 U/L

豬白介素-5（IL-5）ELISA試劑盒Porcine Interleukin 5,IL-5 ELISA試劑盒

豬層連蛋白/板層素（LN）ELISA試劑盒Porcine Laminin,LN ELISA試劑盒

豬Ⅱ型膠原（Col Ⅱ） ELISA試劑盒 Porcine Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA試劑盒

豬可溶性E選擇素（sE-selectin）ELISA試劑盒 Porcine soluble E-selectin,sE-selectin ELISA試劑盒

豬白介素13（IL-13）ELISA試劑盒 Porcine Interleukin 13,IL-13 ELISA試劑盒

豬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2（TGF-β2）ELISA試劑盒 Porcine Transforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA試劑盒

豬E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒Porcine E-Selectin ELISA試劑盒

豬褪黑素（MT）ELISA試劑盒Porcine Melatonin,MT ELISA試劑盒

豬白介素12（IL-12/P40）ELISA試劑盒Porcine Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA試劑盒

豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）ELISA試劑盒Porcine epidemic diarrhea virus antibody,PEDV ELISA試劑盒

豬傳染性胃腸炎病毒抗體（TGEV）ELISA試劑盒Porcine Transmissible Gastroenteritis virus antibody,TGEV ELISA試劑盒

豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）ELISA試劑盒Porcine cardiac troponin Ⅰ,cTn-ⅠELISA試劑盒

豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（GLUT2）ELISA試劑盒 Porcine Glucose transporter 2,GLUT2 ELISA試劑盒

豬二胺氧化酶（DAO）ELISA試劑盒Porcine diamine oxidase,DAO ELISA試劑盒

豬膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）ELISA試劑盒 Porcine cholecystokinin,CCK ELISA試劑盒

豬腸三葉因子（ITF）ELISA試劑盒Porcine Intestinal trefoil factor,ITF ELISA試劑盒

豬活化素A（ACV-A）ELISA試劑盒 Porcine Activin A,ACV-A ELISA試劑盒

豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)（MHCⅠ/SLAⅠ）ELISA試劑盒 swine major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/SLAⅠ ELISA試劑盒

豬β干擾素（IFN-β/IFNB）ELISA試劑盒 Porcine Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA試劑盒

豬食欲素受體（OXR）ELISA試劑盒Porcine Orexin receptor,OXR ELISA試劑盒

豬食欲素/阿立新B（OX-B）ELISA試劑盒Porcine Orexin B,OX-B ELISA試劑盒

豬白介素1α（IL-1α）ELISA試劑盒 Porcine Interleukin 1α ,IL-1α ELISA試劑盒

豬促胃液素受體（GsaR）ELISA試劑盒Porcine gastrin receptor,GsaR ELISA試劑盒

豬生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）ELISA試劑盒Porcine growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA試劑盒

豬地塞米松（Dex）ELISA試劑盒Porcine Dexamethasone,Dex ELISA試劑盒

豬D二聚體（D2D）ELISA試劑盒Porcine D-Dimer,D2D ELISA試劑盒

豬髓過(guò)氧化物酶（MPO）ELISA試劑盒Porcine myeloperoxidase,MPO ELISA試劑盒

豬超氧化物歧化酶（SOD）ELISA試劑盒Porcine Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA試劑盒

豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子（VWF）ELISA試劑盒Porcine von Willebrand Factor,vWF ELISA試劑盒

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子（MMSAM）ELISA試劑盒Porcine melanoma metastasis surface adhesion molecule,MMSAM ELISA試劑盒

豬可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR-2/sFLK-1）ELISA試劑盒Porcine soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2/sFLK-1 ELISA試劑盒