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撫生試劑-化學發(fā)光探針檢測技術速查病原菌
閱讀：203 發(fā)布時間：2014-1-14化學發(fā)光探針檢測技術速查病原菌
吉林檢驗檢疫局建立的金標法檢測單核細胞增生性李斯特氏菌技術作為當今檢測病原體和診斷疾病方面zui為敏感的免疫學技術之一，不僅操作簡便、快速、特異，更為重要的是適用于廣大基層食品監(jiān)管部門的現(xiàn)場檢測和診斷，這些特點都是其他免疫學方法所*的。
該技術不僅具有巨大的發(fā)展?jié)摿Γ疫€具有廣闊的市場和應用前景，如可適用于醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)，出入境食品口岸抽查和鑒定、流通領域衛(wèi)生監(jiān)督和工商行政部門和質監(jiān)部門的食品企業(yè)監(jiān)管等，甚至可以走進餐館、家庭進行簡易的食品自控和檢測等。
由吉林出入境檢驗檢疫局承擔的國家質檢總局科研課題《應用化學發(fā)光探針及免疫金標法檢測食品中多種致病菌的研究》在2011年獲得了國家質檢總局“科技興檢”三等獎。該課題建立的化學發(fā)光探針檢測技術能夠快速檢測食品中常見的四種病原菌：空腸彎曲菌、單核細胞增生性李斯特氏菌、大腸桿菌O157和金黃色葡萄球菌。其中對單核細胞增生性李斯特氏菌還建立了應用免疫膠體金試紙條的快速檢測方法。
急需速測技術
我國的食品加工企業(yè)數(shù)量多，規(guī)模小，較分散，而且為數(shù)較多企業(yè)過分追求利潤法律意識淡薄，社會責任心不強導致其產品質量良莠不齊。
據(jù)報道，我國45萬個食品企業(yè)中，員工人數(shù)10人以下的食品加工小作坊就有35萬家，約占80%，因而導致食品安全事故時有發(fā)生，給社會和消費者的健康造成了巨大危害。
而目前的食品衛(wèi)生監(jiān)管的檢測手段主要依據(jù)或規(guī)定方法進行，雖然這些方法準確可靠，但這些方法一般都需要建設專門的微生物檢測實驗室，配備專業(yè)的檢測技術人員，需要較長的檢測周期，由此造成的檢測成本過高，缺乏時效性等問題，使一些突發(fā)的食品安全事件不能迅速得以解決。因此發(fā)展和建立一種快速、簡便、靈敏準確的檢測技術，作為標準檢測方法的初篩技術，是解決上述問題的有效手段之一。
食品檢驗新兵
化學發(fā)光探針技術的原理是互補的核酸單鏈會特異性識別并結合成穩(wěn)定的雙鏈復合物。這一檢測系統(tǒng)利用一個標記有化學發(fā)光物的單鏈DNA探針，可以特異性的識別和結合目標微生物的核糖體RNA。微生物中的核糖體RNA釋放出來后，化學發(fā)光標記的DNA探針就與之結合形成穩(wěn)定的DNA-RNA雜合體。標記的DNA-RNA雜合體會與非雜交探針分離，并在化學發(fā)光檢測儀中進行測量。樣本的檢測結果通過計算與陰性對照進行比較得出結果。利用化學發(fā)光劑標記和檢測核酸使得許多非放射性標記檢測的靈敏度達到甚至超過了同位素標記測定。
在眾多的化學發(fā)光體系中，應用zui多的化學發(fā)光體主要有三類：增強魯米諾發(fā)光體系、吖啶類化合物發(fā)光體系和堿性磷酸酶催化的1，2-二氧環(huán)己烷發(fā)光體系。吉林檢驗檢疫局建立的化學發(fā)光技術使用吖啶酯標記核酸探針。
利用化學發(fā)光雜交保護分析的原理檢測空腸彎曲菌、單核細胞增生性李斯特氏菌、大腸桿菌O157和金黃色葡萄球菌4種致病菌特異性RNA序列，這種方法無需物理分離，利用吖啶酯標記DNA探針，通過核酸雜交保護分析法，即應用人工合成的靶DNA保守區(qū)的寡核苷酸，在合成時引入一個烷氨基的手臂，經活化后接上吖啶酯，制成化學發(fā)光探針。
雜交后無需分離步驟，而是利用差分水解來鑒別，即加入堿性溶液，游離的發(fā)光探針遇堿水解失去發(fā)光特性，而與特異性目的片段結合的探針形成DNA-RNA雜交體，由于吖啶酯是平面結構很容易進入雙螺旋的內部而獲得雜交保護，水解速度緩慢(半衰期達10分鐘以上)，仍有發(fā)光性能，可以在發(fā)光儀上顯示化學發(fā)光信號，從而實現(xiàn)對病原菌的檢測。
應用前景廣闊
該項目利用膠體金技術研制了膠體金檢測試紙條，用于單核細胞增生性李斯特氏菌的快速檢測，該檢測試紙條的靈敏度高，具有很強的特異性，不同批次的免疫膠體金具有良好的檢測重現(xiàn)性，穩(wěn)定性好，操作簡單，檢測時間只需10至20min即可報告結果，膠體金法無污染，不會危害操作者以及環(huán)境。膠體金抗體復合物在凍干狀態(tài)下室溫儲存相當穩(wěn)定，有效期長;此外膠體金技術還具有檢測迅速、靈敏、不需要復雜儀器設備、產品褪色等優(yōu)點，適合于食品中單核細胞增生性李斯特氏菌的初篩檢驗。
吉林檢驗檢疫局建立的基因探針化學發(fā)光檢測方法可在30分鐘內快速確定病原體，并可直接于固體或液體培養(yǎng)基上鑒定目標微生物。該方法可直接應用于國外的LEADER 50i檢測儀上，儀器自動注入檢測試劑，立刻測量標記物所產生化學反應的化學發(fā)光強度，并自動計算結果及打印報告，該檢測方法敏感性高，特異性強，檢測成本低，操作簡便、快速，對我國食品安全快速檢測和監(jiān)控工作具有重要意義，具有廣泛的推廣前景。