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細胞核提取試劑盒
閱讀：91 發(fā)布時間：2016-3-17ELISA試劑盒一，試劑盒組份（CN1100）
組份
(50T)
(100T)
Lysis Buffer
100 mL
200 mL
Reagent A
2.5mL
5mL
Medium Buffer
25 ml
50 ml
Store Buffer
5mL
10mL
二，說明
細胞核提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的細胞核。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的細胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。
三，操作步驟
1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織20次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。
b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800 × g 5~10 min離心收集細胞。計數(shù)。每次提取需要5 × 107個細胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細胞，再加入50ul Reagent A，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細胞20~30次。
2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，4℃，700× g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀；
3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃， 700 × g 離心5min。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，細胞核沉淀在管底；
4. 棄上清，在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉，1000 × g 離心10min ，棄上清，得較純的細胞核沉淀；
5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。
四 注意事項：
1. 為保證獲得完整的細胞核，*是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備細胞核的zui關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。
2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此計算離心速度。
3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核。
五 儲存：四周內(nèi)使用可4℃儲存，長期置-20℃
轉(zhuǎn)速與離心力換算
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；
[rpm] ２即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。