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1.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析法ELISA試劑盒
現(xiàn)在有許多功用性剖析辦法用于研討轉(zhuǎn)錄調(diào)控,zui常用的辦法是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析法.該辦法是經(jīng)過(guò)必定的轉(zhuǎn)染程序?qū)⒑鈭D調(diào)控區(qū)的質(zhì)粒導(dǎo)人培育細(xì)胞.在典型情況下,調(diào)控區(qū)調(diào)控“報(bào)告基因”的轉(zhuǎn)錄.報(bào)告基因是在mRNA和蛋白質(zhì)的水平上都易于被準(zhǔn)確檢查到的基因 .發(fā)生的質(zhì)粒在培育細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄后,在特定時(shí)刻測(cè)定從報(bào)告基因上合成的mRNA或蛋白質(zhì),以評(píng)估調(diào)控區(qū)的活性.大家將這種剖析辦法稱為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析,由于此刻質(zhì)粒依然以附加的形式存在,很少結(jié)合進(jìn)宿主基因組.因而,mRNA或蛋白質(zhì)產(chǎn)品必須在短時(shí)刻內(nèi)（1～3天）進(jìn)行測(cè)定,不然隨著細(xì)胞的成長(zhǎng)和割裂,質(zhì)粒會(huì)被降解或稀釋.雖然瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析法具有多種局限性,但該辦法依然常用于對(duì)順式效果DNA序列和調(diào)控基因表達(dá)的反式因子進(jìn)行開(kāi)始剖析.
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析法方便、簡(jiǎn)略,易于對(duì)成果定量,因而變成啟動(dòng)子功用剖析的辦法.
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析法也有兩個(gè)首要局限性：首要在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中,質(zhì)粒的人工構(gòu)象和拷貝數(shù)可能會(huì)致使特異性調(diào)控元件失活或具有特異功用;其次,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析法不能用于檢查那些需誘導(dǎo)或分解時(shí)刻超越48～72小時(shí)時(shí)刻期限的研討.
2.安穩(wěn)轉(zhuǎn)染剖析法
對(duì)在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染剖析中未表現(xiàn)出預(yù)期活性的調(diào)控區(qū),或依賴于特異染色質(zhì)構(gòu)造的調(diào)控區(qū),能夠選用安穩(wěn)轉(zhuǎn)染剖析法,即將富含報(bào)告基因的意圖基因調(diào)控質(zhì)粒安穩(wěn)地結(jié)合進(jìn)基因組.此外,還需將由組成型啟動(dòng)子控制的抗藥性基因（如顯性挑選符號(hào)基因）安穩(wěn)地結(jié)合進(jìn)基因組進(jìn)行剖析.抗藥性基因能夠和報(bào)告基因在同一個(gè)質(zhì)粒上,也能夠在不一樣質(zhì)粒上.將富含報(bào)告基因和抗藥性基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染培育細(xì)胞,培育基中參加能殺死不安穩(wěn)表達(dá)抗藥性基因細(xì)胞的藥物,有些質(zhì)粒被安穩(wěn)地結(jié)合到染色體上.大都情況下,在細(xì)胞中多個(gè)質(zhì)粒分子彼此相連構(gòu)成多聯(lián)體,多聯(lián)體隨機(jī)結(jié)合到多聯(lián)體基因組中,因而每個(gè)被安穩(wěn)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞都具有共同的結(jié)合位點(diǎn).然后經(jīng)過(guò)測(cè)定被安穩(wěn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中報(bào)道基因的活性,來(lái)斷定意圖調(diào)控區(qū)的活性.
安穩(wěn)轉(zhuǎn)染剖析辦法的首要長(zhǎng)處是,進(jìn)行剖析的調(diào)控區(qū)及報(bào)道基因一般坐落近乎天然的染色質(zhì)構(gòu)象中,具有近乎天然的拷貝數(shù),這些特色使調(diào)控區(qū)能更地模仿正常功用.在安穩(wěn)轉(zhuǎn)染剖析中,因?qū)D(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行了挑選性擴(kuò)增,所以戰(zhàn)勝子瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞吸收DNA少的缺陷.安穩(wěn)轉(zhuǎn)染剖析的另一個(gè)特色是對(duì)隨后的轉(zhuǎn)錄剖析沒(méi)有時(shí)刻約束.因而,安穩(wěn)轉(zhuǎn)染對(duì)所需時(shí)刻相對(duì)較長(zhǎng)的研討十分有用.安穩(wěn)轉(zhuǎn)染剖析的缺陷是由于要進(jìn)行藥物挑選和細(xì)胞擴(kuò)增,因而操作難度較大,需求的時(shí)刻較長(zhǎng).
3.體外轉(zhuǎn)錄剖析法
體外轉(zhuǎn)錄剖析法適用于難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、在轉(zhuǎn)染剖析中不能發(fā)生具有可檢查活性的啟動(dòng)子或進(jìn)行基因調(diào)控更研討.該剖析辦法的一個(gè)明顯特色是不需求斷定有效的轉(zhuǎn)染條件,并且能夠在體外反響系統(tǒng)中參加抗體,參加或去掉某些轉(zhuǎn)錄因子,以評(píng)估特定轉(zhuǎn)錄因子的功用.
4.轉(zhuǎn)基因剖析法
轉(zhuǎn)基因剖析法是將報(bào)告基因和意圖調(diào)控區(qū)安穩(wěn)地隨機(jī)結(jié)合到動(dòng)物基因組中,以檢查天然的前后序列中調(diào)控區(qū)的活性.該剖析辦法能用于承認(rèn)轉(zhuǎn)染剖析中判定的特定調(diào)控區(qū)或調(diào)控元件.
5.同源重組剖析法
同源重組剖析法很少用,僅在培育細(xì)胞或動(dòng)物基因組中對(duì)內(nèi)源基因進(jìn)行操作.

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