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            輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣

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            • 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣

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            • 品牌 其他品牌
            • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
            • 所在地 上海市

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            更新時(shí)間:2022-06-10 16:06:55瀏覽次數(shù):333

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            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50管/24樣
            貨號(hào) AS63211 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 僅供科研 檢測(cè)方法 可見(jiàn)分光光度法
            輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣公司正在出售的產(chǎn)品;NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒100管/96樣輔酶Ⅱ系列
            NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒50管/48樣輔酶Ⅱ系列6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒100管/96樣輔酶Ⅱ系列6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒50管/48樣輔酶Ⅱ系列胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc

            詳細(xì)介紹

            商品屬性:

            產(chǎn)品名稱輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣
            檢測(cè)方法可見(jiàn)分光光度法
            產(chǎn)品規(guī)格50管/24樣
            產(chǎn)品貨號(hào)AS63211

            商品介紹:

            測(cè)定意義

            輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

            測(cè)定原理

            分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測(cè)吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。

            需自備的儀器和用品

            可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

            試劑的組成和配制:

            酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。

            自備儀器和用品:

            可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

            NAD+和NADH的提取:

            1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取

            NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建

            議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);

            冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中

            和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建

            議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);

            冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中

            和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            2、組織中NAD+和NADH的提取:

            NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g

            組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴

            中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g

            組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴

            中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和,

            混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取:

            NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性

            提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液),

            超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min

            (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加

            入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿

            性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液),

            超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min

            (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加

            入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。


            ADH測(cè)定操作:

            1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

            2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。

            3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。

            4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。

            注意:空白管只需測(cè)定一次。

            注意事項(xiàng):

            ①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

            ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

            ③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

            ④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

            ⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

            ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。

            ⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

            ⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

            ⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。

            6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測(cè)試盒50管/48樣    輔酶Ⅱ系列

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            肌酸激酶(CK)測(cè)試盒50管/48樣    輔酶Ⅱ系列

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            脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒10管/9樣    輔酶Ⅱ系列

            脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒25管/24樣    輔酶Ⅱ系列

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            蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒50管/48樣    輔酶Ⅱ系列

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            硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測(cè)試盒50管/48樣    輔酶Ⅱ系列

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            還原型GSH)測(cè)試盒50管/48樣    列

            氧化型GSSG)含量測(cè)試盒100管/96樣    系列

            氧化型GSSG)含量測(cè)試盒50管/48樣    列

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            過(guò)氧化物酶(GPX)測(cè)試盒50管/48樣    列

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            硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒50管/48樣   系列

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